1、什么是瞬时表达和稳定表达?
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瞬时表达:外源片段不能随细胞分裂而一同复制,导致表达时间短暂,且表达量随时间逐渐下降。
稳定表达:是指外源片段整合入细胞基因组中,并能随细胞分裂稳定传递下去,表达量长时间处于稳定水平。
那稳定株,顾名思义当然是属于稳定表达的体系了。
2、我的实验是否需要筛选稳定株?
能够达到稳定表达的方法不止稳定株一种哦。我们使用慢病毒感染细胞,也一样可以达到稳定表达的效果。什么原理呢?
*慢病毒是整合型的逆转录病毒载体,感染细胞后,携带的外源片段会直接整合入细胞的基因组DNA中,并能够随细胞分裂稳定传代。所以对于大多数实验,包括细胞周期、凋亡、增殖等功能学实验,甚至裸鼠成瘤等长时间的实验,只要细胞感染效率较高(70%~80%以上),感染一次慢病毒就可以达到长时间、高效的基因操作的目的,满足实验要求,无须筛选稳定细胞株。
3、细胞感染效率较高(70%~80%以上),臣妾做不到啊,难感染的细胞怎么办?
少年,恭喜你选择了hard模式。那就赶紧召唤稳定株吧。那么问题来了,选择何种方式将外源片段整合入细胞基因组中呢?
质粒(常规转染/电转):这种方法介导的整合几率和中500w彩票差不多哦