肺炎支原体冷凝集实验

【原理】 原发性非典型性肺炎患者血清中常产生冷凝集素。冷凝集素是一种自身抗体，在寒冷（4℃）情况下，可与红细胞抗原起反应，一般可与O型人红细胞或自身红细胞发生凝集反应，可用于该病的辅助诊断。冷凝集反应具有可逆性，若将已凝集的红细胞再放回37℃时，凝集现象即消失。
【材料】
1、患者血清：切勿将血液放在冰箱内析出血清，在冬季室温低于-20℃时，可将标本置于37℃孵箱析出血清，随即分离进行实验。
2、人红细胞悬液：“0”型血或患者自身的抗凝血以无菌,0.9%氯化钠溶液稀释至2%。
【方法】
1、于试管架上排列小试管10支，每管内各加0.9%氯化钠溶液0.5ml。
2、加患者血清0.5ml于第1管内混匀后，吸出0.2ml加入第2管内，顺次连续稀释至第9管，混匀后弃去0.5ml。第10管不加血清作为对照。
3、每管内各加入25血细胞悬液0.2ml，振荡混合后，置冰箱内24小时或过夜。此时各管血清最终稀释度依次为1:4，1:8，1；16，1：32，1：64，1：128，1;256，1:512，1；1024
【结果】
1、冷凝集有可逆性，在较暖的室温中，凝集现象迅速消失，故在冰箱内取出试管后，应立即观察结果。
2、取出时尽量避免震动，先观察管底红细胞沉淀形状，再轻摇试管，如有明显的凝集现象，记录凝集效价。
3、对照管内的红细胞，轻摇后应完全分开，无凝集现象。
4、如遇阳性结果，最好将试管再放入37℃水浴箱内5—30分钟，重新观察一次，如红细胞完全分散，凝块消失，则证实为真正的冷凝集现象，否则可能由于其他凝集素所致，不作阳性报告。