人类ABO 血型鉴定试验(玻片法)
1.原理
人类ABO血型抗原有A和B两种。A型红细胞膜上有A抗原,B型红细胞上有B抗原,AB型有A和B两种抗原,而O型则不含有A和B抗原。据此,如分别将抗A和抗B血清与待测红细胞混合,抗A和/或抗B血清与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集,根据其凝集状况便可判定受试者的血型(见表5-1)。
表5-1血型鉴定试验结果与判定
2.方法
(1)用酒精棉球消毒无名指指端皮肤或耳垂,待酒精干后用无菌采血针刺破表皮,用毛细吸管取血1~2滴,放入含1m1 生理盐水的小试管中,混匀,即成待检红细胞悬液(约2%)。取血后,应立即用无菌干棉球压迫针眼止血。
(2)取凹玻片或载玻片一张,用记号笔分为两格,并注明A、B字样。
(3)用巴氏吸管吸取抗A血清、抗B血清各一滴分别滴于A、B格内(也可用2ml的一次性注射器代替巴氏吸管)。
(4)另用巴氏吸管取待测5%红细胞悬液,于A格和B格内各加一滴。然后分别用牙签将抗血清与红细胞搅拌均匀(也可轻轻晃动载玻片以促其充分混匀),以加速其反应。将玻片放置于实验台上静置数分钟后,在白色背景下观察凝集情况。
3.结果观察与判定
如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为澄清,并出现大小不等的红色凝集块者即为红细胞凝集;若混合液仍呈均匀混浊状,则表明红细胞未发生凝集。
如肉眼观察不够清楚,可将玻片置于显微镜下用低倍镜观察。
不凝集(-)凝集(+)
4.注意事项
(1)试验用凹玻片或载玻片要清洁,注明A 和B 字佯。
(2)所用抗A、抗B血清必须在有效期内(注意试剂包装说明的有效期限)使用。
(3)待检红细胞悬液不宜过稀或过浓。
(4)要及时观察结果,以防时间过长使标本干涸而影响结果观察和判定。
三、试管凝集反应
1.原理
试管凝集反应是一种定量试验,常用已知颗粒性抗原来检测未知抗体及其含量。方法是用生理盐水将待测血清在试管中进行连续倍比稀释,然后于各管中加入等量已知抗原悬液,37℃过夜或56℃水浴2小时后,观察有无凝集并根据凝集程度,判定待检血清抗体的效价。
本法主要用于某些传染病的辅助诊断及流行病学调查,如伤寒、副伤寒及布氏杆菌病的诊断等。
2.方法
(1)取洁净小试管8只并依次排列于试管架上,用特种铅笔或记号笔按顺序注明号码。
(2)将1ml刻度吸管套上乳胶皮头,吸取生理盐水0.9ml 加至1号试管,余下每管中分别加入0.5ml 生理盐水。
(3)用1ml刻度吸管取0.1ml抗伤寒杆菌“H”血清于第1管中。
(4)用1ml吸管在1号管内连续吸吹三次,使血清与生理盐水充分混匀,然后吸取0.5ml加至2号试管,随后按上法进行倍比稀释直至7号试管,最后从7号管中吸出0.5ml混合液弃去。至此,1~7号试管的血清稀释度依次为1:10,1:20,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640,而8号管中只有0.5ml生理盐水,此管系阴性对照管(见图5-1)。
(5)取5ml吸管吸取伤寒杆菌H菌液,加于1~8号试管中,各加0.5ml。此时,每支试管中的液体量均为1ml,1~7号试管的血清最终稀释度分别为1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280。
(6)持试管架轻轻振荡摇匀,以使血清与菌液混合均匀。然后置37℃恒温箱过夜或56℃水浴箱2h,再观察结果。