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酶标抗体的质量鉴定与保存

2020.9.07
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

1. 酶活性和抗体效价测定

采用双向免疫扩散法(稀释抗体)和DAB-H2O2显色反应检测结合物中抗体效价和免疫沉淀线中的酶促反应。

2. 酶量和IgG量

酶量(mg/ml)=OD403´0.4

IgG量(mg/ml)=(OD280-OD402´0.42)´0.94´0.62

其中,0.42为酶蛋白本身(0.3)及结合戊二醛后增加的OD值,0.94为抗体蛋白与醛化酶结合后,OD280约增加6%,故乘以0.94。兔IgG的OD280=1.0时为0.62.

过碘酸钠标记法IgG量(mg/ml)=(OD280-OD402´0.3)´0.94´0.62

标记率= OD403/ OD280=0.3-0.6,即一个抗体分子上结合1-2个HRP分子.标记率可以大于0.6-0.9。OD403/ OD280=0.4,约相当于E/P=1.0。

酶标抗体的保存

经鉴定合格的酶标抗体,由于硫化物及叠氮化物等可与酶结合,使HRP失活,因此,不能用硫化物及叠氮化物作为防腐剂,可加入等量的60%甘油,小量分装(0.5ml/支),置4℃~-30℃保存。


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