实验原理
维生素B1（硫胺素）属于水溶性维生素，在碱性高铁氰化钾通夜中，能被氧化成一种蓝色的荧光化合物－硫色素，在紫外线下，硫色素发出荧光。在给定条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，此荧光之强度与硫色素的浓度成正比。利用人造沸石对维生素B1的吸附作用去除样品中的干扰荧光测定的杂质，然后洗脱维生素B1,
测定其荧光强度。
试剂和器材
一、试剂
碱性高铁氰化钾：1mL 1％的高铁氰化钾溶液，用15％NaOH 稀释至15mL。
2.5 mmol/L无水NaAc溶液：205g无水NaAc用水溶解并稀释至1000mL。
25％酸性KCl溶液：8.5mL浓HCl用25％KCl溶液稀释至1000mL。
25%KCl溶液; 无水正丁醇; 15％NaOH溶液; 20％(w/v)连二亚硫酸钠（Na2S2O4）; 0.04%溴甲酚绿指示剂。
维生素B1标准液的配制：
A) 维生素B1标准储备液（25μg/mL）：准确称取标准品维生素B1 100mg溶于0.01mmol/L盐酸中，稀释至1000mL，于冰箱中保存。
B) 维生素B1标准工作液：维生素B1标准储备液稀释100倍，用冰醋酸调至pH4.5。避光，贮于4℃冰箱。
二、材料
麸皮。
三、器材
试管1.5×15cm（×4），移液管10mL（×1）, 5 mL（×4）；带塞锥形瓶250mL（×1），沸水浴，布氏漏斗，人造沸石，荧光分光光度计。
操作方法
一、样品制备
称取2~10g样品于100mL三角瓶中，加入50Ml
0.1mol/L盐酸，搅拌直到颗粒物分散均匀，在沸水浴中水解样品30min。水解液冷却后，滴加2mol/L醋酸钠，用0.04%溴甲酚绿作外指示剂调至pH为4.5。离心10min，3000r/min。向上清液中加入人造沸石2－4g，振摇30min，用布氏漏斗抽滤，用蒸馏水洗涤沸石3次，洗液弃去。然后用5mL酸性KCl搅拌，洗脱3次，洗脱液合并，并用25％酸性KCl溶液定容至25ML。
二、氧化
将5mL样品净化液分别加入1、2试管中。在避光条件下将3mL 15％氢氧化钠溶液加入试管1中，将3mL
高铁氰化钾溶液加入试管2中，振摇15s，然后加入10mL
正丁醇，剧烈振摇90s。重复上述操作，用标准工作液代替样品净化液。静置分层后吸去下层碱性溶液，加入2－3g无水硫酸钠使溶液脱水。
三、测定
1．于激发光波长365nm，发射光波长435nm测量样品管及标准管的荧光值。
2．待样品及标准的荧光值测量后，在各管的剩余液（约5~7ml）中加0.1mL 20%连二亚硫酸钠溶液，立即混匀，在20s内测出各管的荧光值，作为各自的空白值。
四、计算
按下式计算样品中维生素B1的含量：
式中： X —样品中含维生素B1的量，mg/100g；
A —样品荧光值；
B —样品管空白荧光值；
C —标准管荧光值；
D —标准管空白荧光值；
f —稀释倍数；
m —样品的质量，g；
S —标准管中的维生素B1含量，μg；
100/1000 —将样品中维生素B1量由μg/g折算成mg/100g的折算系数。
注意事项
加入人造沸石要过量，保证维生素B1的定量吸附。
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