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脂肪酸的β-氧化

2020.9.07
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

原理
根据β-氧化学说,机体组织能将脂肪酸氧化生成乙酰辅酶A。两分子乙酰辅酶A可再缩合成乙酰乙酸。在肝脏内,乙酰乙酸可脱羧生成丙酮,也可还原生成β-羟丁酸。乙酸乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况下,其产量甚微;患糖尿病或食用高脂肪膳食时,血中酮体含量增高,尿中也能出现酮体。
本实验用新鲜肝糜与丁酸保温,生成的丙酮可用碘仿反应测定。在碱性的条件下,丙酮与碘生成碘仿。
操作方法
击毙动物(家兔、大鼠或豚鼠),迅速放血,取出肝脏,在玻璃皿上剪成碎糜。
取50毫升锥形瓶 2个,各加入 3毫升 Locke氏溶液和 2毫升 PH7.6的磷酸缓冲浪。在一个锥形瓶中,加入3毫升0.2N丁酸溶液,另一个锥形瓶作为对照。取约0.5克肝组织两份(相等重量),分别置于两个锥形瓶内。混匀,于37℃恒温水浴内保温。
保温2小时后,取出锥形瓶,各加入2毫升15%三氯乙酸溶液,在对照瓶内追加3毫升0.2N 丁酸溶液。混匀,静置 15分钟后过滤。分别吸取 5毫升滤波,放入另外两个锥形瓶中,再各加5毫升0.IN碘溶液和5毫升10%氢氧化钠溶液。摇匀后,静置10分钟。加入5毫升10%盐酸溶液中和。然后,用0.1N硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘。滴至浅黄色时,加入3滴淀粉溶液作指示剂。摇匀,并继续滴到蓝色消失。记录滴定样品与对照所用的硫代硫酸钠的毫升教,并按下式计算样品中丙酮含量:

式和B为滴定对照实验所消耗的0.1N硫代硫酸钠溶液毫升教;A为滴定样品所消耗的0.1N硫代硫酸钠溶液毫升数:0.9667为1毫升0.1N硫代硫酸钠溶液所相当的丙酮毫克数。
试剂和器材
一、试剂
(1)动物:家兔、大白鼠等。肝糜必须新鲜,放置久则失去氧化脂肪酸能力。
(2)Locke氏溶液:取 0.9克氯化钠、0.042克氯化钾、0.024克氯化钙、 0.015克碳酸氢钠及0.1克葡萄糖,溶于水中,稀释到100毫升。
(3)0.1N碘溶液:称取12.7克碘和约25克碘化钾,溶于水中,稀释到1000毫升,混匀,用标准硫代硫酸钠溶液标定。
(4)PH7.6,1/15的磷酸缓冲液。
(5)0.2N丁酸溶液:取18毫升正丁酸,用1N氢氧化钠溶液中和PH=7.6,并稀释至1000毫升。
(6)15%三氯乙酸溶液。 (7)10%氢氧化钠溶液。
(8)10%盐酸溶液 〔9〕0.1N硫代硫酸钠溶液
二、器材
(1)玻璃皿 (2)锥形瓶(50毫升)
(3)试管及试管架 (4)吸量管(2、5毫升)
(5)漏斗 (6)微量滴定管(5毫升)
(7)剪刀及镊子 (8)小台称。
(9)恒温水浴


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