过碘酸-雪夫（PAS）染色

实验原理
　　胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）经过碘酸（periodicacid）氧 化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合，形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。该反应称为过碘酸-雪夫 (PAS)阳性反应，以前也称为糖原染色。
实验方法
　　材料：
　　1.高碘酸氧化液：
　　HIO4·2H2O1g,
　　蒸馏水加至100ml。
　　此液溶解后保存于冰箱中待用。
　　2.Schiff试剂：
　　将1g碱性品红溶于200ml煮沸的蒸馏水中。摇荡5分钟，冷却至600C左右，过滤，并向滤液中入1mol/LHCl20ml，混匀。冷至 250C时，加2g偏重亚硫酸钠（或钾）（Na2S2O5）。将此液置带塞的棕色玻璃瓶中，放暗处24小时。加1g活性碳，摇动1分钟，滤纸过滤。保存于 冰箱中。
　　3.亚硫酸液
　　100g/L偏重亚硫酸钠6ml
　　1mol/L盐酸5ml
　　蒸馏水100ml
　　每次用前新鲜配置。
　　4.20g/L甲绿
　　甲绿2g
　　蒸馏水加至100ml
　　5.淀粉酶嚼石蜡刺激分泌唾液离心取上清液，内含淀粉酶，将麦芽糖淀粉酶0.1~1.0g溶于0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.0）100ml中。
　　方法：
　　1.固定新鲜干燥的涂片用品5%乙醇固定10min，蒸馏水冲洗，待干；
　　2.如涂片需要消化，可加唾液或麦芽糖淀酶，置室温消化60min，然后用蒸馏水冲洗；
　　3.10g/L高碘酸氧化15～20min,蒸馏水冲洗，待干；
　　4.置雪夫染液中室温染色30～60min；
　　5.用亚硫酸溶液冲洗3次后，再用自来水冲洗2～3min，待干；
　　6.20g/L甲绿复染10～20min；
　　7.水洗，待干，镜检。
实验结果计算
　　（1）中性粒细胞糖原含量参考标准：
　　（-）胞质无颗粒
　　（+）胞质呈淡红色，无颗粒
　　（++）胞质呈红色，有少量颗粒
　　（+++）胞质呈暗红色，颗粒较密
　　（++++）胞质呈紫红色，颗粒极密
　　（2）淋巴细胞系：
大多数淋巴细胞呈阴性反应，少数为（+）的阳性反应。
　　淋巴细胞糖原含量程度参考标准
　　（-）胞质内无颗粒
　　（+）胞质内有颗粒
　　（++）有较粗红色颗粒
　　（+++）有粗大红色颗粒
　　（++++）颗粒粗大并有红色块状
　　（3）红细胞系：
　　幼红细胞和红细胞呈阴性反应
　　红细胞系列糖原含量程度参考标准
　　（-）胞质无颗粒
　　（+）有少数红色颗粒
　　（++）有较粗红色颗粒或弥漫红色
　　（+++）有粗大红色颗粒或深红色
　　（++++）有粗大红色块状或紫红色
　　（4）巨核细胞：
　　巨核细胞和血小板染色反应均为阳性
　　巨核细胞糖原含量程度参考标准
　　（-）胞质无颗粒
　　（+）少量糖原包涵体
　　（++）中等量糖原包涵体，定位于核膜出或分散胞质中，占胞质1/3
　　（+++）大量糖原包涵体分散于胞质的1/2
　　（++++）糖原包涵体充满整个胞质
　　（5）单核细胞呈阴性或阳性，颗粒细小，往往位于胞质边缘：
　　浆细胞大多呈阴性，少数为红色颗粒阳性；
　　组织细胞为阴性反应；
　　巨噬细胞可呈阳性，为红色颗粒反应。
注意事项
　　1.所用染色缸及器具应十分清洁、干燥；
　　2.固定试剂不同，染色效果不同。目前较常用的有95%乙醇、纯甲醇及甲醛蒸气，其中乙醇固定后糖原颗粒明显，各成熟粒细胞的反应有较明显的颜色差异，易于判断阳性反应的程度，且唾液消化后的对照标本没有假阳性，故通常选用乙醇为固定剂；
　　3.10g/L高碘酸溶液质量要保证，变黄则不能用，氧化时间要准确，否则将导致假阳性或假阴性；
　　4.碱性品红试剂对染色的影响不同品牌的碱性品红染色效果不一，碱性品红的质量是试验成败的关键因素之一。希夫(Schiff)染液应避光保存，无色，变红则失效；
　　5.染色后标本应及早观察和记录，染色后标本保存8天后，将逐渐褪色，保存时间延长，褪色更为明显。