实验目的：
了解掌握检测 DNA 质量的方法以及 DNA 定量的方法；了解影响 DNA 在琼脂糖凝胶中泳动速率的因素；训练 DNA 的琼脂糖凝胶电泳操作及 DNA 的限制性内切酶操作。
实验原理：
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP
的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA 分子,然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成:
一种为限制性内切核酸酶(限制酶),它切割某一特异的核苷酸序列;
另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列。Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA 的基础。
绝大多数Ⅱ类限制酶识别长度为4 至8 个核苷酸的回文对称特异核苷酸序列
实验材料及试剂：
转基因烟草总 DNA ，琼脂糖，限制性内切酶 Dra I ， EcoRI ，EcoRV ， HindIII
实验步骤：
1．取 10μl DNA 于 0.8% 凝胶检测；
2．将 DNA 调节浓度至 300-400 ng/μl；
3．仔细阅读将所用的任何一种酶产品说明书，熟悉反应条件及酶切的贮存浓度（ 10U-50U/μl ）厂家配套试剂；
4．计算据反应条件所需要的各种试剂准确用量：（ 0.5 ml tube 中）
DNA(3-5μg) 10μl
10 × buffer reaction 1.5μl
Enzyme (15 U/μl) 0.8μl （冰上）
ddH2O 2.7μl
混匀，短暂离心；
5．37 ℃ 温浴 1-2 hrs ( 纯 DNA) 或 10 hrs （粗制 DNA ）；
6．加入上样缓冲液终止酶切反应，也可 65 ℃加热 10 min 使酶变性失活；
7．电泳检测酶切效率：
每个样品取 1/10 量用琼脂糖电泳检测，制胶及点样方法同上。
结果分析：
若水稻 DNA 呈现均匀连续分布的一片，则酶切效果好，否则需重做；
DNA 被切烂： DNA 降解，重新提 DNA ；
DNA 切不动：杂质多（多糖，蛋白质，酚类，有机溶剂等），重新纯化；
若是 BAC 克隆 DNA ，酶切后应出现多条很清晰的不同大小 DNA 带。
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