靶细胞杀伤实验：Cr51法

一、原理
 
用Na2 51 CrO 4 标记靶细胞，若待检效应细胞能杀伤靶细胞，则51 Cr( 铬) 从靶细胞内释出。以γ计数仪测定释出的51 Cr 放射活性，靶细胞溶解破坏越多，51 Cr 释放就越多，上清液的放射活性也就越高，应用公式可计算出待检效应细胞的杀伤活性。
 
二、步骤
 
（以CTL杀伤肿瘤细胞为例）：
 
1、效应细胞
 
将分离的外周血T细胞, 培养7d后按照DC:T = 1:10的比例分别加入自身细胞致敏DC,细胞系致敏DC及未致敏DC, 继续培养3-4d后收集T细胞, 此即为效应细胞CTL.
 
2、靶细胞
 
分别收集1×106 Panc1以及从6例肿瘤组织中分离获得的胰腺癌细胞(编号S1-S6), 重悬于0.5mL不含碳酸氢钠的完全培养液. 加入3.7 MBq 51Cr铬酸钠, 37℃水浴中标记1 h, 洗涤细胞三次, 调整细胞浓度为5×104/mL.
 
3、细胞毒效应
 
向96孔板加入靶细胞, 每孔100 μL. 按效应细胞:靶细胞= 50:1的比例向各孔加入100 μL不同效应细胞. 每组均设3个复孔, 阴性对照孔(自发释放)只加100 μL完全培养液, 阳性对照孔(最大释放)加100 μL 1% NP40 (v/v). 将96孔板置37℃培养4 h后, 1000 g离心培养板10 min, 每孔吸取100 μL上清在液闪计数仪上测定每分钟放射活性(cpm值).
 
细胞杀伤活性按以下公式计算: CTL活性(%) = [(实验组cpm-自发释放cpm)/(最大释放cpm-自发释放cpm)]×100%.

 统计学处理采用SPSS统计软件, 所有变量均以mean±SD表示. 变量间差异显著性比较用方差分析(Student-Newman-Keuls法).