一、试剂和缓冲液配制
1、胎牛血清（氯化十六烷基吡啶）
（1）解冻胎牛血清
（2）在56℃加热30分钟（脱补体作用，盖上瓶）
（3）取25ml上述液体放在无菌的50ml的falcon里分馏
（4）在-20℃冰冻馏份
2、磷酸盐缓冲液（PBS）
（1）无钙镁离子的100ML的PBS（10×）（生命技术）
（2）900ML蒸馏水
（3）2克葡萄糖
（4）在无菌的FALCON里过滤，分馏，在-20℃冰冻
3、胶原蛋白酶（0.2%在PBS溶液里）
（1）把0.2克的胶原蛋白酶溶解于100ML的PBS溶液里
（2）在暗箱（铝箔）里混合10分钟
（3）用氢氧化钠1N调整溶液PH值至7.40
（4）过滤（0.22U）
（5）分馏和冰冻在-20℃
4、保存和运输脐带的缓冲液
（1）PBS 50ML
（2）多粘菌素E，抗敌霉素[多肽类抗生素] 1ML
（3）青霉素G 1ML
5、培养基
（1）M199“stock”M199 Earle 10× 100ml，蒸馏水 900ml
（2）M199“完全”
谷氨酰胺 0.2M 1ML
羟乙基哌嗪乙磺酸 1M 1.5ML
37.5%碳酸氢钠（W/V） 1.8ML
青霉素 1ML
胎牛血清（加热至56℃，离心） 20ML
M199“stock” 加至100ML
在+4℃下保存1周
二、细胞培养
1 术前1天
（1）取一滴纤维结合蛋白覆盖有盖培养皿（35MM，7个/根脐带）
（2）准备3个装有50ML保存脐带缓冲液的容器
2 手术当天
（1）用一个容器装50ML生理纤溶酶，保存在37℃下（bain-marie）
首页
