内皮细胞培养以人脐带静脉灌流消化法的简介

　　1、产后新鲜脐带，无菌剪取 10—15 厘米长一段，如不能立即培养，可于 12 小 时内保存于 4℃。

　　2、用三通注射器吸取温 PBS 液注入脐静脉中洗去残血，在入口处用线绳扎紧， 以防液体返流。

　　3、用血管钳夹紧脐带一端，从另一端向脐静脉中徐徐注入浓度为 0.1%的粗制胶原酶，充满血管，消化 3—10 分钟；注入口用线绳扎，以防液体返流。

　　4、吸出含有内皮细胞的消化液，于离心管中，注入温 PBS 轻轻反复冲洗后，一 并注入离心管中（此步骤可重复） 。

　　5、离心去上清，加入RPMI1640培养液制成细胞悬液，接种入培养器皿中，置温 箱培养。两至三天可见细胞长成单层。

　　神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质细胞因子时，可出现一定程度的分化，长出突起等现象， 但很难使之增殖。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来，胶质细胞在培养中生长不稳定，不易自发转化，但对外界因素仍保持很好的敏感性，可用 ROUS病毒和SV4等诱发转化。