【结果判断】
细胞出现程序化细胞死亡时，在琼脂糖凝胶电泳带上呈现有一定间隔的梯状条带，而细胞坏死时则呈模糊的片状条带（无间隔），阴性对照者仅在近电泳点样处出现基因组条带。
（3）流式细胞仪观察－PI染色法
【原理及意义】
细胞凋亡时，流式细胞检测可呈现亚二倍体核型峰的特征。此外，根据细胞光散射特
点，应用碘化丙啶（PI）染色可使之与坏死相区别。在ＤＮＡ直方图上，凋亡细胞出现亚二倍体峰，表现为二倍体峰（Ｇ１细胞）的减少，在Ｇ１峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型。而坏死时，细胞周期中的细胞均出现不同程度的减少，亚二倍体细胞量多少不等。在光散射图谱上，前向光散射与细胞大小有关，细胞凋亡时常表现为细胞皱缩，故前向光散射低于正常。细胞坏死时，常表现为细胞肿胀，故前向光散射高于正常。侧向光散射与细胞内粒子性质有关，由于细胞凋亡或坏死均有细胞内碎片增多，故侧向光散射均高于正常。总之，细胞凋亡出现低于正常的前向散射和较高的侧散射，坏死时则呈较高的前、侧散射光谱。
【材料】
１试剂：碘化丙啶（PI）染色液，Rnase（1mg/mL），70%冷乙醇，0.01mol/L、Ph7.2PBS。
２器材：试管，流式细胞仪。
【方法】
（a）标本制备
１培养细胞
（１）收集悬浮细胞于离心管中。贴壁细胞视情用酶消化后制成单细胞悬液，悬浮细胞合并。
（２）800～1000ｒ/min离心，5min，共2次。
（３）用400目筛网过滤2次。
２新鲜实体组织
（１）取材组织用PBS漂洗干净后，浸泡在含PBS的平皿或青霉素小瓶中。
（２）用眼科剪尽可能将组织剪碎。
（３）吸去上清液，组织块转入大瓶中加入10～20mL组织消化酶（含200μｇ/mL胶原酶），37℃，30min，并在磁力搅拌器上搅拌。
（４）在不锈钢网上轻轻研磨，使组织和细胞分离。
（５）滤液用200目筛网过滤2次。
（b）荧光染色：上述细胞制备后均应进行荧光染色。
（１）制备的单细胞悬液可用70%乙醇固定，4℃保存。
（２）染色前用PBS进行离心沉淀去除固定液。
（３）加200uL RnaseＡ，37℃水浴30min。
（４）再加入800uLPI染色液混匀，至4℃避光30min。
（５）上机测试。记录激发波长488nm处红色荧光。
【结果】
细胞凋亡时，G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型。在光散射图谱上，前向光散射低于正常，侧向光散射高于正常。细胞坏死时，细胞周期中的细胞均出现不同程度的减少，亚二倍体细胞量多少不等。在光散射图谱上，前向光散射和侧向光散射均高于正常。
【注意事项】
悬浮细胞收集时要保证足够数量，否则影响结果准确性。
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