4. LCs中的睾酮合成受m6A mRNA修饰调控
根据前期研究数据显示m6A修饰可以参与胚胎发育，那么是否也能够影响LCs发育呢？作者利用比色法检测整体甲基化水平（云序生物提供此服务），发现在LCs发育过程中m6A整体水平逐渐下降，同时ALKBH5（Eraser）和FTO(Eraser)表达逐渐增加和METTL14(Writer)表达下调。为了进一步研究m6A修饰在LCs发育调控中的重要作用，作者还检测了无精子症或少精子症患者体内LCs中m6A的甲基化水平，实验表明这些患者体内的甲基化水平升高了，并且m6A和HSD3B（睾酮合成能力检测）呈负相关，提示m6A修饰可能介导LCs中睾酮的合成。
图4. LCs中的睾酮合成受m6A mRNA修饰调控
5.m6A甲基化影响Camkk2 RNA的稳定性
既然m6A能够影响AMPK信号通路的激活，那么m6A修饰是否作用于Cammkk2呢？作者通过MeRIP-qPCR(云序生物提供此服务)技术证实Cammkk2存在2个甲基化修饰位点，同时经过HsCG处理后甲基化水平明显下降，并且利用RIP（云序生物提供此服务）实验分析发现Cammkk2与YTHDF2(Reader)紧密结合，这也证实了m6A修饰降低Camkk2的转录表达。
图5. m6A甲基化影响Camkk2 RNA的稳定性
6. m6A甲基化促进Ppm1a的翻译
作者观察到YTHDF1（Reader）或METTL14敲除后LCs中PPM1A的表达降低，但是Ppm1a
mRNA的水平没有明显变化，有可能是蛋白稳定性或者翻译效率导致Ppm1a蛋白表达下降。利用蛋白翻译抑制剂CHX处理LCs，观察METTL14敲除与未敲除后PPM1A在LCs中的降解速率，实验结果表明HsCG降低了Ppm1a的表达，而敲除ALKBH5却没有；并且RIP（云序生物提供此服务）实验分析发现PPM1A与YTHDF1紧密结合，同时CoIP(云序生物提供此服务)分析表明HsCG处理后促进了YTHDF1与EIF3A（真核翻译起始因子3）和EEF2(真核翻译起始因子2)结合,这些结果都说明m6A只是通过调节PPM1A的翻译而不是影响蛋白的稳定性。作者利用MeRIP-qPCR(云序生物提供此服务)进一步探讨Ppm1a甲基化位点信息，发现Ppm1a存在5个甲基化修饰位点，并且位于3’U 区域甲基化位点能够促进Ppm1a的翻译。
图6. m6A甲基化促进Ppm1a的翻译
7. HsCG对METTL14/ALKBH5的影响
研究发现HsCG通过诱导METTL14降解降低其表达，并且通过提高ALKBH5转录水平增加ALKBH5的表达，而CHIP实验（云序生物提供此服务）也证实HsCG诱导促进TFEB和CEBPB与ALKBH5启动子的结合从而提高其转录水平，增加ALKBH5的表达。
图7. HsCG对METTL14/ALKBH5的影响
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