纤维蛋白原是所有凝血因子中含量最高的一种凝血蛋白，其在血浆中的浓度可高达4g/L；其分子结构以及由纤维蛋白原转化为纤维蛋白的详细化过程（包括纤维蛋白（原）经纤溶酶溶解生成FDP的过程）早已搞清。就是这样一种蛋白，至今仍无理想的临床常规检测方法。文献中查到和临床实验室正式使用过的检测方法有数十种。这些方法有的精密度及准确性较好，但操作过于复杂、繁琐，不适于常规应用；有的虽简便、快速，但准确性及精密度都较差。现有的方法大体上分三大类：即（1）基于凝血酶的作用，形成纤维蛋白的方法；（2）物理化学测定法和（3）免疫学测定法。
第一类方法是一种功能测定法，所形成的纤维蛋白，又可再分为测重法，酚试剂比色法和紫外光度法、测氮法、浊度法和凝血酶凝固时间法等。这类方法的优点是测定的是有凝血功能的纤维蛋白原，又称为可凝固蛋白（clottable protein），故特异性较好。方法可简可繁，常规使用中，多采用较简便的Von Clauss法。[17]根据这种方法设计的商品药盒（kit），已在一些国家广泛使用。据1975年美国CAP的调查，1939个临床化验室中，用此法者占1824家，即94%用了本法，其中Tan等采用了速率法。[16]这类方法中由Ratnoff 和 Menzzie改良的酚试剂比色法，其曾被提出作为参考方法。近几年来，不少文献推荐用Jocobsson的改良法作为纤维蛋白原标准的定值方法。这类方法的缺点是，从理论上讲，有两方面可引起误差。一是所析出并测定的是纤维蛋白而非纤维蛋白原。已知纤维蛋白原变成纤维蛋白时会从α和β肽链上分别切下两个短肽，即A肽（FpA）和B肽(FpB)。这样纤维蛋白实际上比纤维蛋白原的质量少了10%。[14]二是已知纤维蛋白旦形成，就会吸附一些凝血因子或纤溶因子，这样又会增加所测纤维蛋白原的量。此外，本法在操作中在获取纤维蛋白和洗涤（挤压）除去其它蛋白成份时，不仅比较麻烦而且也难以完全彻底，会造成其它蛋白污染。
第二类方法（物理化学测定法）在我国应用最广。这类方法又可分为盐析法（包括用亚硫酸钠、硫酸铵或氯化钠盐析，用蛋白质显色或比浊法测定），热变性沉淀法和电泳法等几种。这类方法都比较简单、快速，尤其适于急诊检验，但缺点是本法的特异性不强。所测的不是有凝固功能的纤维蛋白原，可能包括部分的降解产物和/或其它蛋白。而电泳法又太繁琐，不适于常规工作。
第三类方法（免疫学方法），是将纯纤维蛋白原作为抗原免疫动物，制成多克隆或单克隆抗体。然后用免疫胶乳、被动血凝或反向血凝、单向免疫扩散、火箭电泳以及ELISA等方法测定。优点是大部分方法简便，但缺点是所测的不仅是可凝固的纤维蛋白原，可能包括了它的降解产物（因为它们有共同抗原），也可能包括了障碍性纤维蛋白原（dysfibrinogens即N端谷氨酸γ位未羧化的无功能的纤维蛋白原,又称缺维生素K引起的蛋白质，PIVKA）。但免疫法也有一个好处，就是可用来测定PIVKA。如果一个患者总纤维蛋白原（用免疫学测定结果）不低，甚至增高，而功能性（即可凝固性）纤维蛋白原却明显减少，即可判断为存在PIVKA。肝病、维生素K缺乏等均可导致PIVKA升高，有临床诊断价值。总的说来，免疫学方法用于临床常规实验室仍存在一定问题。
近年来，国内引进很多自动血凝分析仪，这些仪器在测PT时往往同时报告纤维蛋白原。其原理和理论根据是：当PT测定完成时，全部纤维蛋白原均变成纤维蛋白（相当于Clauss法血浆中加入了凝血酶），其形成的浊度与纤维蛋白的含量成正比。因此，不需另加任何试剂，即可由浊度直接推算出纤维蛋白原的含量。故本法又称为PT导出（或衍生）纤维蛋白原测定法，简称PT-Der法。关于本法的可靠性，国外不少研究者已作过比较，总的情况是：此法精密度相当高，当血浆纤维蛋白原含量在正常范围时，PT-Der法与经典的Clauss法无显著差异或略高于Clauss法；但当纤维蛋白原减低时，PT-Der法往往偏高（p<0.001）,故此法用于纤维蛋白原含量减低者应慎重.国内目前采用此法者已逾来逾多。由于不断有文献报道，血浆纤维蛋白原水平的变化不仅与凝血障碍、出血、DIC、应激（因为它也是一种急性期蛋白）有关，而且与冠心病，心肌梗塞有关，因此临床上倍受重视。不仅工作量增大而且对方法准确性的要求也越来越高。但至今WHO、ICSH和NCCLS仍未明确提出一个纤维蛋白原的标准化或推荐方法，供临床常规使用。但作为方法标准化的第一步，纤维蛋白的标准已经有国际参考制品；另外用于标准品的标化也有一个推荐方法。以下重点介绍这两个方面。
一、纤维蛋白原的国际标准品
1992年英国国家生物标准及控制研究所（NIBSC），研究完成了一个纤维蛋白原标准品，编号为89/644，向WHO和生物标准专家委员会（ECBS）推荐，[15]并被ECBC批准为国际参考品（IRP）。从此，各国均引进这一标准品来标化本国或工厂生产的次级标准品（我国卫生部临床检验中心亦已在引进）。使纤维蛋白原测定的标准化工作，走出了关键的一步。因此根据以往的调查。各家标准品纤维蛋白含量互相差别很大，有的竟相差达到200%！
二、推荐的测定方法
各家用IRP来标化自己的标准时，推荐采用Jacobsson的改良法，现将该法介绍如下。
试剂
1、缓冲液：Na22H2O 0.882g; KH2PO4 2.77g加水至1L，此为贮存液；将贮存缓冲液1份，加生理盐水2份即为应用缓冲液，PH为6.35。
2、生理盐水：0.15mo1/L
3、人或牛凝血酶，500IU/ml,生理盐水溶液。
4、凝块溶解剂：尿素400g溶于少量蒸馏水中，继加入200ml 1.0mol/L NaOH,再加水至1L。
操 作：
将纤维蛋白原冻干（标准）品（源于89/644）加1ml蒸馏水复溶，加到含有2ml应用缓冲液的有机玻璃浅盘或其它容器中，再加入凝血酶液50ml,迅速混匀，在室温中静置2小时。将容器倒扣于吸水的布上（其下可垫吸水纸），再用适当物质（如滤纸）将凝块吸干。将凝块取下，置于50ml生理盐水中洗涤两次，每次洗涤后均应将凝块吸干（可用玻璃挤压凝块），尽量除去含于凝块中的液体，以免液体中的其它血浆蛋白残留。必要时可在清洁棉布上挤压。
小心将凝块加入含凝块溶解剂7.5ml的容器中，摇匀，直至凝块完全溶解后混匀。倒入光径为1cm的比色杯中，以凝块溶解剂为空白，在280nm和 315nm波长读取吸光度（A）。
计 算：
纤维蛋白原浓度（g/L）=（A280-A315）×7.5/15.87=(A280-A315)×0.47
式中15.87为纤维蛋白在碱性条件下波长280nm的消光系数;7.5为 纤维蛋白原的稀释倍数。
当A在1.0以下时，吸光度与浓度呈线性关系。如A大于1.0，应稀释标本重新测定，重新乘稀释倍数。
上述方法，比较繁琐，仅适用于参考液的标定。至于常规工作中的纤维蛋白原测定，比较简便、准确、精密度也较好的是凝血酶凝固时间法，即Clauss法，现介绍如下。
三、适于常规工作的纤维蛋白原测定方法（Clauss法）
原 理：
将凝血酶加到血浆中，使纤维蛋白原变成纤维蛋白，使出现凝固。在有足量的凝血酶时，与不同含量的纤维蛋白原作用，其出现凝固的时间与纤维蛋白原含量呈负相关。
试 剂：
1、牛凝血酶100NH/ml
2、纤维蛋白原标准品（IRP次级标准）
3、缓冲液（下列两种任选一种）：
（1）巴比妥缓冲液（PH7.5）；巴比妥钠2.75g,璐氯化钠7.3g溶于750ml去离子水中,校正至PH7.5,加水至1L。
（2）咪唑（Imidazole, 或 Glyoxaline）缓冲液：咪唑3.4g(0.05M),氯化钠5.85g，加于约500ml水中；加0.1mol/L盐酸186ml,调pH至7.3-7.4，最后加蒸馏水至1L。
测定步骤
1、手工法
（1）用上述缓冲液先将标准品稀释成0.8,1.6,2.4,和4.0g/L纤维蛋白原浓度。各浓度再用缓冲液作1：10稀释。
（2）患者血浆及质控物用缓冲液作1：10稀释。
（3）浆含100NHU/ml,混匀后室温保存。
如用仪器法测定，则用100NIHU/ml,不必稀释。
（4）在一试管中，加稀释血浆0.2ml,置37℃水浴中4分钟。
（5）加入预温37℃的凝血酶液0.2ml,摇匀并立即开动秒表,不断观察凝固时间。至出现凝固时停表。
（6）每份标本测定两次，求平均数。同时测定各标准管和对照（质控）管，方法相同，准确记录时间。
（7）计算
用双对数计算纸作图，以凝固时间为纵坐标，纤维蛋白原浓度为横坐标，将各相应浓度的标准管对凝固时间，在图上标出相应的点并连成直线，制成标准曲线。然后根据患者和质控血浆所得的凝固时间，在图上查到纤维蛋白含量。
如血浆纤维蛋白含量大于4g/L，应稀释血浆后重测，结果乘以稀释倍数。
如血浆纤维蛋白含量低于0.8g/L，需浆原血浆改为1：2或1：5稀释，在标准曲线上查得结果后除以5或除以2。
2、仪器法
本法可用自动或自动凝血仪，按凝血酶时间（TT）测定法测定。可自动打印出结果。一般仪器法比手工法精密度高，尤其是在含量高时，仪器法比手工法更好。
本法的干扰因素主要是肝素。在高浓度时可造成假的低值（可通过加入硫酸鱼精蛋白而消除）：PIVKA变可造成假低值。
主要是误差来源
1、血浆稀释不准确
2、凝血酶活性不足或丢失。凝血酶一般应在低温保存，稀释后在塑料（聚乙烯）试管中4℃保存,可保存活性24小时.
3、测定终点观察不准确，尤其是纤维蛋白原含量高时，往往在8秒钟左右即凝固，手工法重复性较差，不易做准。
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