依赖核酸序列的扩增技术检测

　　1 核酸提取

　　NASBA 方法的核酸提取可按照常规的RNA提取方法进行，根据实际需要可以采取不同的方法。

　　2 核酸扩增

　　将纯化的RNA 加到标准的NASBA 反应体系中后，先在65 ℃条件下作用5 min 去除RNA 的二级结构，然后在恒温的42 ℃条件下开始扩增反应。

　　3 产物的检测

　　直接检测是早期应用的比较简单的检测方法，应用的较少。具体操作是将反应产物直接在琼脂糖甲醛变性凝胶上电泳，用EB（溴化乙锭）染色，在紫外灯下观察单链RNA 片段的长度。该方法只能初步检测反应产物，如果进一步鉴定反应产物还需要结合其他检测方法，如Northern blot、限制性酶内切位点分析等。

　　寡核苷酸检测该方法，是将NASBA 技术和ELISA (酶联免疫吸附剂测定)方法相结合，其原理与电化学发光检测类似，都是通过将与检测信号有关的物质标记在核酸探针上，通过检测该信号从而间接检测RNA。不同的是核酸探针上是用地高辛（Digoxygenin，DIG）标记的，通过探针捕获将地高辛标记的探针和NASBA 产物的复合物吸附到微量反应板上，作用于底物硝基苯基磷酸盐显色，然后通过分析吸光度来检测RNA 产物。该方法需要使用酶标仪。