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细胞总培养不好,你考虑过是支原体在作乱吗

2021.5.28
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空空

好好工作,天天开心

实验室里总会有各式各样的细胞需要培养,养细胞的会发生一些囧事:不做实验的时候,细胞长得老快了;一到做实验的时候,自家的细胞好像吃了瞌睡药一样,昏昏欲睡,死活长不起来。

导致细胞生长缓慢的常见原因:

如果排除了其他试剂选择不当、细胞株老化、细菌污染……原因,而仍有上述一种或几种情况,则高度提示:细胞可能出现了支原体污染。据报道,细胞培养中发生支原体污染的机率较高,会达到70%左右,常规抗生素的使用对支原体几乎无效。

那么,支原体污染,对细胞培养有什么危害呢?

 

支原体穿透真核细胞表面 大量支原体聚集在真核细胞表面(扫描电镜照片)

细胞被支原体污染,解决方案:

方法一:确认细胞已被支原体污染,终止试验,丢弃所有被污染的细胞和耗材。

重新复苏细胞,注意选用未被污染的细胞株、血清和培养基,并规范操作。

方法二:对于珍贵的,样品不可再得的细胞,或价格昂贵的种子细胞,不但无法丢弃,而且作为种子细胞,还需要彻底根除支原体污染。

此时,需选用特异性的支原体杀除剂,清除污染,保护细胞。

目前世界上有效的方法是是德国的一款生物试剂,由Minerva公司生产,品名Mynox®。

此试剂可在2-3小时内将支原体主动杀除,但对细胞无毒害作用。特别适合细胞保种。

Mynox®为枯草杆菌中提取出的生物制剂,加入培养液中,可特异性地与支原体膜结合,改变膜通透性。通过此生物物理的方法,2~3小时内,即可把细胞中的支原体杀除掉。因为细胞膜结构与支原体膜不同,故Mynox®不会与细胞膜结合,因此无细胞毒性。

注意:3小时后,需将此试剂洗脱,将细胞更换到新的培养耗材和培养液中,重新培养。

此时,不应使用PCR方法检测细胞中支原体。由于支原体解体,故PCR结果为假性强阳性。


丁香通
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