细胞培养基础——处理方法

一、 贴壁细胞

接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片， 显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。

用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的) 。

严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)，放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。

用PBS 2-3mL轻轻洗细胞表面，洗1-2遍，吸走PBS，加入0.25%胰酶EDTA 1ml,37度培养箱消化，消化到显微镜下观察细胞变圆但未完全脱落时，吸取正在消化的胰酶轻轻吹打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止消化，混匀细胞。

900rpm, 3min离心，加新的培养基重悬细胞。

传代换新的细胞培养瓶，放置于37℃，5% CO?的培养箱中培养。

二、 悬浮细胞

接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。

用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。

严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

细胞培养瓶内的细胞吹打均匀,用吸管将培养基完全吸出(严禁直接倾倒)。

900rpm, 3min离心，加新的培养基重悬细胞。

换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，放置于37℃，5% CO?的培养箱中培养。