细胞株的传代与培养

　培养细胞株传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长细胞如COS-7、CHO等用消化法传代；部分贴壁生长的细胞如PC12用直接吹打即可传代。

　　一、用品

　　(1)  0.25％胰蛋白酶，全培养液

　　(2)  滴管，离心管，培养瓶(皿)，培养瓶盖，注射器，计数6

　　二、步骤

　　(1) 贴壁细胞的消化法传代：

　　①  吸除瓶内旧培养液。

　　②  以50ml培养瓶为例，向瓶内加入2-3ml胰蛋白酶，轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面。

　　③  消化在37C或室温25C以上环境下进行。消化后把培养瓶放置显微镜下进行观察．发现胞质回缩、细胞间隙增大后。应立即终止消比，然后吸掉消化液后再加全培养液终止消化。

　　④  用弯头吸管，吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，吹打过程要顺序进行，从培养瓶底的一端开始到另一端结束，以保证所有的底部都被吹到。吹打动作要轻柔同时尽可能不要出现泡沫。这些都对细胞有损伤。细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。

　　⑤  计数，分别接种在新的培养瓶内。

　　部分贴壁生长细胞，不经消化处理直接吹打也可使细胞从瓶壁脱落下来，而进行传代。但这种方法于部分贴壁不牢的细胞，如Hela、PC12细胞等。直接吹打对细胞损伤较大，细胞常也有较大数目的丢失，因而绝大部分贴壁生长的细胞均需消化后，才能吹打传代。