一 相关概念
根据取代基的不同,常用作化学发光标记物的吖啶取代物分为两类:吖啶酯(I)和吖啶磺酰胺(II)。它们的结构中都有共同的吖啶环。
它们的发光机理相同:在碱性H2O2溶液中,分子受到过氧化氢离子进攻时,生成不稳定的二氧乙烷,此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N - 甲基吖啶酮,当其回到基态时发出光子。
二 反应原理
无需一个催化过程,也不需要增强剂,从而降低了背景发光,提高了信噪比,干扰作用少。一般采用原位进样和时间积分法测量信号。
三 反应过程
四 发展历程
第一代结构简单,和蛋白时需要EDC等偶联剂;
第二代在第一代基础上增加了活化好的羧基集团,可以直接偶联蛋白(国内);
第三代在前一代基础上改变侧链结构,增加发光效率,改变亲水性等;
第四代直接合成带有小分子抗原结构(如激素,多肽等)的复合物(国外)。
五 与其他主流化学发光区别
技术类型 | 标记、反应体系 | 主要优点 | 主要不足 | |
化 学 发 光 | 酶促 | 过氧化物酶、鲁米诺、氧化剂、增强剂等 | 测量方式简单(速率法)成本较低、灵敏度较高 | 工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移 |
螺旋金刚烷环氧化物、碱性磷酸酶 | 测量方式简单(速率法)灵敏度较高 | |||
非酶促 | 吖啶酯、过氧化氢 | 灵敏度较高 | 发光时间短测量方式复杂(积分法)需原位进样(In Situ Injector)仪器成本及维护费用较高试剂成本较高 | |
电化学发光 | 钌(Ru)的络合物脉冲电场激发 | 灵敏度较高、试剂较稳定 | 测量方式复杂(脉冲激发、间歇式测量、流动池)仪器成本及维护费用高环境及样品中同类元素可导至本底干扰 |
测量方式的区别
六 总结
从实际情况来看,各种化学发光方法学之间并无试剂性能上的明显差异;厂家可以根据市场情况与自身条件选择合适自己的体系方法。