在使用荧光蛋白上样缓冲液需要关注哪些细节？

 荧光蛋白上样缓冲液在电泳前的样品处理阶段对SDS-PAGE的蛋白样品进行预染，标记上荧光。实验完成以后，凝胶中或转膜后的蛋白条可直接通过紫外灯、LED灯或其他数字成像系统进行观察和分析，无需染色脱色。荧光蛋白上样缓冲液灵敏度高比银染高。稳定性强，背景低。可对所有蛋白进行染色，不影响蛋白的迁移率与电泳图谱。电泳过程中，游离的染料分子与溴酚蓝的迁移速率一致，跑胶结束时移至凝胶末端，背景干净。荧光蛋白上样缓冲液非常适合用于追踪蛋白表达纯化以及Western blot的SDS-PAGE。

  荧光蛋白上样缓冲液在进行蛋白样品变性处理的同时对蛋白进行预染色，电泳结束后即可直接使用凝胶成像仪的紫外光源或者LED灯观察电泳结果。免去了染色法染色脱色的过程，不增加任何其它操作步骤，不使用任何有机溶剂，保护环境,实验室再无蓝色污渍，电泳结束即可观察实验结果，节省了实验时间。

  荧光蛋白上样缓冲液在使用时应注意以下几点：

  1. 请勿使用该上样缓冲液处理预染的或预处理的蛋白分子量标准。这些产品与不兼容。
  2. 灵敏度影响因素：高pH（大于7）不会影响染色，低pH则会降低染色的效率，如果样品的pH低于5，建议将pH调整7以上。
  3. 不适合在如下SDS-PAGE实验中使用：切割蛋白条带用以测序、质谱分析或抗体制备。

  4. 建议-20℃避光保存，如果室温放置2-3周，则可添加新的DTT，蛋白条带会重新变得清晰和明亮。添加DTT的终浓度不要超过20 mM。也可以添加其他还原剂TCEP，效果也很好。