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初学者如何做好蛋白表达?古朵技术@

2021.8.29
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空空

好好工作,天天开心

重组蛋白表达技术可以用来分析基因调控以及研究蛋白质结构和功能。无论是体内功能研究还是用于结构研究的大规模生产,以及生物治疗领域的药物开发都需要用到蛋白表达技术。

1、蛋白质通用合成路径
DNA —>mRNA—> 蛋白
实际操作流程为:
1. 克隆或合成目的基因
2. 载体构建
3. 蛋白表达与纯化
4. 蛋白的大量表达与纯化(或无)

2、克隆或合成目的基因
典型的表达载体包括至少4个主要元件:
目的基因表达框(包括启动子和基因终止或 poly (A) 信号)
细菌的复制起始点(ori)
特定宿主的抗生素选择框(如潮霉素 B、霉酚酸、嘌呤霉素、杀稻瘟菌素 S 等)
大肠杆菌的抗生素选择框(如氨苄青霉素、杀稻瘟菌素 S、羧苄青霉素、Zeocin 选择性抗生素抗性等)

其他元件还包括:
多克隆位点(MCS)(即多酶切接头)
表位标签
分泌信号
蛋白酶识别位点
内部核糖体插入位点(IRES)

3、不同蛋白表达系统选择




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