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先说这个实验总体的背景，有黑点，这种背景非常像封闭液没有完全溶解带有杂质，或者是容器没洗干净，有脏东西了，最好把封闭液用0.22um的膜过滤一下再做。然后其他器皿都洗刷干净。洗液里面加点tween试试。再一个看条带，感觉特异性不太好，条带太多了。看过抗体厂家提供的图也是这样的吗？可以先试试把抗体浓度降低，孵育时间缩短，减少非特异结合。但是从你的情况看，估计很容易导致特异蛋白没信号，不过还是值得一试的。内参看的话，抗体特异性好很多呢。所以可能抗体的问题会比较大。这个抗体别人用怎么样啊？
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