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异同?我觉得还是看你用的机器和试剂盒吧,主要是那个聚合酶的要求。有的推荐两步法,有的推荐三步法。比如,ABI,roche都推荐两步法,tiangen的推荐三步法。我觉得,如果引物设计时的Tm值如果接近60度(比如用ABI的primerexpress设计的引物),就直接用两步法;如果Tm值不太符合两步法要求,即60度,还是三步法好些!