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离心机在实验室应用中的案例

2021.11.01
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zhaoqisun

致力于为分析测试行业奉献终身

核酸提取分离方法

核酸提取分为传统方法和商业化试剂抽提。

传统的方法一般会采用酚/氯仿抽提及乙醇沉淀来提取核酸。

商业化试剂盒方法提取核酸,比较经典的是采用离心柱法,将硅胶膜固定在离心管中,通过离心力或者负压让液体通过硅胶膜,核酸就留在膜上。在经过洗涤、洗脱的步骤得到核酸。商业化试剂盒的应用还能避免试剂污染。

不管是传统的方法,还是商业化试剂盒方法,都需要注意下面这些问题。

温度

核酸是非常敏感脆弱的样品,所以离心机的控温性能要好,才能防止核酸降解。

离心的温度尽量维持在 4 ℃,转子的材料也要尽量选用导热性能好的材料,防止样品温度和设置的温度偏差变大。

角度与离心力

转子的设计角度, 45° 角转是比较优秀的,便于核酸的收集,还能减少样品的损失。离心力设置尽量大于 10,000 x g, 离心力越大,离心时间越短。

其他注意点

● 提取核酸的试剂会有一定的腐蚀性,为了防止试剂腐蚀转子,最好选择带 PTFE 涂层的转子,这种涂层耐酸、耐碱、耐各种有机溶剂。

● 在使用试剂盒抽提的时候,要尽量选用试剂盒专用的 Kit 转子,不需要剪盖,转子边缘采用加宽设计防止打掉离心管盖。

血液(采血管)的离心分离

收集血液之后,一般是对真空采血管进行离心,真空采血管管内为负压并且密封良好。

根据诊断目的的不同,有的时候血液样本也需要进行离心分离处理。

这个时候,也需要用到离心机啦。

温度

对血液样本后续处理方式不同,对温度的要求也不同。

角度与离心力

因为医院需要处理的样本比较多,大通量的离心处理是更有优势的。

一般选用水平转子进行离心分离,通量大,分离效果好,用角转也可以进行分离,不过优势没有水平转子明显。分离所需要的离心力较小,一般小于2,500 x g。比如在《临床化学检验血液标本的收集与处理》要求中,就提到了将相对离心力控制在1,000 x g~1,200 x g。

气密性与防污染

为了安全起见,选用气密性的吊篮,防止采血管破裂产生的气溶胶污染。定期对离心机的吊篮和适配器进行高压灭菌,也能进一步预防污染的发生。

其他注意点

带软加速/刹车功能的离心机,能防止离心分层后的样品重悬。

PBMC 单核细胞的密度梯度离心分离

血液主要由血清和血细胞组成,主要包括红细胞,白细胞和血小板等。白细胞还可以细分为淋巴细胞和单核细胞等。由于这些细胞具有简单的细胞核,统称为外周血单核细胞 (PBMC)。

PBMC 单核细胞可通过 Ficoll 密度梯度离心的方法,从血液中进行分离。

在 Ficoll 密度梯度离心的过程中,需要注意的有:

● 使 Ficoll-Paque Plus 和 PBS 升至室温,并用 70% 乙醇消毒血袋外部,良好的温度 (18-20℃) 控制有利于稳定 Ficoll 的密度,可以实现更好的分离效果

● 血液与 PBS 的比例保持 1:1,拧紧盖后颠倒混合几次

● 可以使用 ep 25 mL 锥底管,并轻轻的将血液/PBS 混合物铺置 Ficoll 上

● 离心参数:400 x g, 20 ℃,加减档 0/0,防止离心结束后的刹车震动,降低重悬,更利于良好分层。随后开启“Atset”功能,可以在达到指定转速后开始计时,离心 30 分钟

● 使用 PBS 洗涤细胞,离心除去残余的 Ficoll 液,400 x g, 20 ℃,10 分钟,重复几次

细胞培养液的离心分离

在收集我们精心培育的细胞的时候,一般会选择锥底形状的离心管或者离心瓶,并且采用低速的水平转子来进行离心。

为了保持细胞的完整性,离心的时候要尽量避免使用急刹车。选择带软刹车/加速(多档刹车/加速)的离心机,可以避免收集到的细胞重悬。


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