常见，在使用一个样品检测多个mrna时比较有用。然而一步法rt-pcr具有其他优点。一步法rt-pcr在处理大量样品时易于操作，有助于减少残余污
染，因为在cdna合成和扩增之间不需要打开管盖。一步法可以得到更高的灵敏度，最低可以达到0.1pg总rna，这是因为整个cdna样品都被扩增。
对于成功的一步法rt-pcr，
一般使用反义的基因特异性引物起始cdna合成。
一步法
两步法
起始第一链cdna合成使用：
起始第一链合成使用
oligo(dt)
gsp引物
随机六聚体
gsp引物
优点
优点
灵活
方便
引物选择
扩增酶同逆转录酶预先混合
扩增酶的选择
转管步骤少，减少污染可能性
困难rt-pcr的优化能力
高灵敏度
同
platinum酶结合提高特异性
适用于大量样品分析
同platinumpfxtaqdna聚合酶结合提高忠实性
适用于定量pcr
适用于在单个样品中检测几个mrna
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