金标免疫分析方法原理和操作办法

　　1、原理

　　利用不同的增菌培养基，提供给 E.coli O157：H7 ，迅速复活和生长所必须的营养物质及其他因素（利用 REVEAL 培养基，可以在8h 得到检测结果。其他培养基如《FDA 细菌分析手册》推荐的增菌培养基也可用于检测卡检测，允许检测时间在20h 内）取一部分（120μL）经增菌培养的培养液于检测卡的圆形样品孔中，样品则被涂有胶体金标记的抗 E.coli O157：H7 ），则与胶体金标记的抗体结合，并离开样品区沿着硝酸纤维素膜流向涂有抗 E.coli O157：H7 ，抗体的检测区，此时免疫复合体被捕获并聚集，显示出一条检测色带。无论样品中是否含有 E.coli O157：H7 ，样品剩余液继续流向膜顶端的试剂区该试剂区含有胶体金标记的合适抗原（颜色指示）形成阴性对照质控区，样品流经此区时被捕获并聚集显示出一条质控色带。质控带的出现可证明检测过程正常，如下图所示。

　　2、仪器设备及试剂

　　E.coli O157：H7 ，检测试剂盒（如REVEAL E.coli O157：H7 ，检测系统，VIP Test，BINAX NOWTMEH E.coli 检测卡等）增菌培养基［REVEAL 8h,REVEAL 20h，FSIS 的修改的 EC 肉汤＋新生霉素（mEC＋N）等］，细菌培养箱，灭菌吸管，样品均质器。

　　3、操作方法

　　①样品制备

　　同常规方法。

　　②增菌培养

　　选用适宜的增菌培养基或由试剂盒配用的培养基根据试验要求选择增菌时间（8～20h）。

　　③检验

　　取适量增菌液（约150μL）滴入检测卡的样品孔中，静置约5min，从视窗观察结果，在检测区和质控区同时出现色带的为阳性；仅质控区出现色带的为阴性。上图中详细操作可参照各种试剂盒的操作说明。