细胞培养瓶在细菌检查中的应用

利用细胞培养瓶可对细菌进行溶源性检查,具体操作方法如下:

1.溶源菌培养:将经LB斜面活化的大肠杆菌225(λ),接种于装有20mlLB培养液的250ml细胞培养瓶内,30℃振荡培养16h,再从中取2ml菌悬液接入另装有20ml LB培养液的250ml三角瓶内,37℃振荡培养2h至对数期。

2.排除游离噬菌体:如待检菌株为芽孢杆菌,可先制成孢子悬液,再经80℃ 10min处理,杀死溶源菌表面可能吸附的及游离的噬菌体;如待检菌抹为非芽孢杆菌,可利用噬菌体制备的抗血清或0.2%柠檬酸钠溶液洗涤对数期溶源菌细胞,除去表面吸附的及游离的噬菌体。然后经4000r/min离心10min,上清液可加人敏感指示菌做双层平板测定,用于检验样品屮足孖钌游离的噬菌体及吸附「溶源菌表曲的噬菌体,离心后的菌体细胞进行诱导处理。

3.诱导溶源菌:离心后收集的菌体用无菌生理盐水洗涤两次,用生理盐水或100mmol/l Tris-HCL缓冲液(pH7.0)制成终浓度为1011个/ml细胞的菌悬液,每皿加5ml菌悬液,经紫外灯30W,距离30cm、照射30s,立即加入5ml双倍浓度的LB培养液,混匀后37℃黑暗中培养2h。

4.溶源性菌株检查:按双层琼脂法操作,取上述诱导裂解液加入几滴氯仿,以10倍稀释法适当稀释,选择后3个稀释度的稀释液,毎个稀释液取0.3ml与0.2ml对数期敏感大肠杆菌226菌悬液混匀,再加入融化后冷却至45℃的LB半体培养基,立即混匀,随即倾入LB固体培养基平板上,待凝固后,37℃培养6h观察。经过培养的平板如果有大量噬菌斑出现就证明被检菌株是溶源菌。

检查细菌是否具有溶源性可按照以上步骤进行操作,操作时注意过程中的无菌性,避免因操作不当影响检测结果。