转基因产品的检测可以从核酸和蛋白质水平上进行检测。
定量检测主要是基于核酸水平的检测,由于目前转基因技术中使用的基因构件主要来源于花椰菜花叶病毒(CaMV)的 35S 启动子和脓杆菌的 Nos 终止子,绝大部分转基因产品含有这两个基因片段,所以检测 35S 启动子和 Nos 终止子基本可达到检测转基因产品的目的。
但由于 35S 来源于花椰菜花叶病毒,十字花科的植物(如油菜)易自然感染 CaMV,如果对进口转基因油菜针对 35S 设计引物进行检测,则可能将感染 CaMV 的非转基因油菜判定为转基因产品,从而引起贸易纠纷。鉴于此,对这类产品应进行目的基因检测。同时还应选择合适的植物内源基因作为阳性扩增对照,检查核酸抽提质量。选择合适的引物、荧光探针及适宜的 PCR反应体系可进行转基因定量检测。此方法须设计一个内部探针,该探针包含5′端荧光报告因子和3端淬灭因子。
PCR 反应前,由于种灭因子与荧光报告因子的位置相近,使荧光受到抑制而检测不到荧光信号。随着 PCR 反应从上游的 PCR 引物开始,引物和标记探针与目标 DNA 分子中对应的互补序列复性,聚合酶与探针相遇利用其5'核酸外切酶活性使报告因子释放产生的荧光可被内设的激光器记录,记录到的荧光强度可反映 PCR 的产物量,从而实现实时定量分析。市场上有三种具有竞争力的定量 PCR 仪器:PE7700,Lightcycler以及 BioRad 定量 PCR 仪。
实验中所需要的试剂供应商有试剂盒提供。这三种仪器均以闭管系统运行,而且无需进行扩增后操作,避免了污染问题短时运作便可获得数据进行分析,费时极少。
real-time 法的灵敏度至少是竞争 PCR 的10倍,可检测到每克样品中 2pg 转基因的 DNA量。该实验操作自动化,可在提取 DNA 后 3h 内完成检测分析。检测信号具有特异性,对未加工、加工和混和的样品都可检测。已有实验室用 real-time 法作 GMO 定量筛选的检测方法,但对方法的标准化研究仍有待加强。缺点是需要购买价格昂贵的专门仪器,较难推广。
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