(1)原理 胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯(红色)水解为乙酸与靛酚(蓝色),有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用,使催化、水解、变色的过程发生改变,由此可判断出样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
(2)试剂
①速测卡:固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片(广州天河绿洲生物化学研究中心)
②pH7.5缓冲溶液:分别取15.0g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)与1.59g无水磷酸二氢钾(KH2PO4),用500mL蒸馏水溶解。
(3)仪器 常量天平,有条件时配备37℃±2℃恒温装置。
(4)分析步骤
①整体测定法
a.选取有代表性的蔬菜样品,擦去表面泥土,剪成0.5cm左右见方碎片,取5g放入带盖瓶中,加入10mL缓冲溶液,振摇50次,静置2min以上。
b.取一片速测卡,用白色药片蘸取提取液,在37℃温度中放置10min,有条件时在恒温装置中放置,预反应后的药片表面必须保持湿润。
c.将速测卡对折,用手捏3min或用恒温装置恒温3min,使红色药片与白色药片叠合反应。
d.每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
②表面测定法(粗筛法)
a.擦去蔬菜表面泥土,滴2～3滴缓冲溶液在蔬菜表面,用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
b.取一片速测卡,将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
c.在37℃温度中放置10min,有条件时在恒温装置中放置,预反应后的药片表面必须保持湿润。
d.将速测卡对折,用手捏3min或用恒温装置恒温3min,使红色药片与白色药片叠合反应。
e.每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
(5)结果判定 结果以酶被有机磷或氨基甲酸酯类农药抑制(为阳性)、未抑制(为阴性)表示。
白色药片不变色及略有浅蓝色均为阳性结果,白色药片变为天蓝色为阴性结果。对阳性结果的样品,可用其他分析方法进一步确定具体农药品种和含量
(6)速测卡技术指标
①灵敏度指标
②符合率在检出的30份以上阳性样品中,经气相色谱法验证,阳性结果的符合率应在80%以上。
(7)说明 韭菜、生姜、葱、蒜、辣椒、胡萝卜等蔬菜中,含有破坏酶活性或使蓝色产物退色的物质,处理这类样品时,不要剪得太碎浸提时间不要太长,必要时可采取整株蔬菜浸提的方法。
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