1、移液管和移液器
使用移液管和移液器时应注意:①使用移液管时应使用吸球或定量移液器;②移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染;③为减少气溶胶的产生,应避免向含有感染性物质的溶液中吹入气体,避免将移液管中的液体用力吹出,刻度移液管不需要排出最后一滴液体;④污染的移液管需完全浸入盛有消毒液的防碎容器中消毒至规定时间。盛放废弃移液管的容器应放在生物安全柜内;⑤打开封口瓶子时应使用移液管的工具,避免使用皮下注射针头和注射器;⑥为避免感染性物质从移液管中滴出而扩散,在工作台面应放置浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸,使用后按感染性废弃物处理;⑦在每阶段工作结束后,必须采用适当的消毒剂清除工作区的污染。
2、微生物接种环
要求直径2～3mm并完全封闭,柄的长度小于6cm以减小抖动。使用封闭式微型电加热器消毒接种环,或使用一次性接种环。
3、生物安全柜
使用生物柜应注意:①须具有生物安全柜书面规章、使用操作说明或安全手册;②生物安全柜应在运行正常时使用,所有工作必须在工作台面的中后部进行;③安全柜内应尽量少放置器材或标本,避免任何物品阻挡安全柜内前后的空气格栅,避免影响安全柜后部压力排风系统的气流循环;④尽量减少操作者身后的人员活动,避免操作者手臂在安全柜里反复移出和伸进,以防干扰安全柜气流;⑤在安全柜内的工作开始前和结束后,安全柜的风机应至少运行5分钟;⑥实验完成后以及每天工作结束时,应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭;⑦在生物安全柜内操作时,不得进行文字工作。
4、离心机、匀浆器、组织研磨器、摇床、搅拌器和超声处理器
避免气溶胶及标本的溢出,保证仪器正常运行是使用这些仪器的基本原则。
(1)离心机:离心机运行操作、离心管标本装量与配平、离心机维护等内容见第二章常用仪器设备安全使用。操作具有生物危害的样本时,需要特别注意:①离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。操作危险度Ⅲ级和Ⅳ级的微生物,必须使用可封口的离心桶(安全杯)。②应每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染,以评估离心操作规范。每次使用后,要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。
(2)匀浆器、组织研磨器、摇床、搅拌器和超声处理器:使用以上仪器时应注意:①使用专门提供实验室用的以上仪器。确认仪器运转正常。②由于玻璃可能破碎而释放感染性物质并伤害操作者,建议使用塑料容器,如聚四氟乙烯(PTFE)容器。③用匀浆器、摇床和超声处理器时,应该用结实透明的塑料箱覆盖设备,并在用完后消毒。可能的话,这些仪器可在生物安全柜内覆盖塑料罩进行操作。④使用玻璃研磨器时要求戴手套并用吸收性材料包住。建议使用塑料研磨器。⑤操作结束后,应在生物安全柜内打开容器。⑥超声处理器操作人员应采取听力保护措施。
5、冰箱
实验室冰箱应明确其规定用途。使用中应注意:①冰箱、低温冰箱和干冰柜应当定期除霜和清洁,应清理出所有在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品。清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护,清理后要对内表面进行消毒。②储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的科学名称、储存日期和储存者的姓名。未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃。③应当建立冻存物品清单④除非有防爆措施,否则冰箱内不能放置易燃溶液。冰箱门上应明确标示。
6、玻璃器皿和锐器
实验室中尽可能用塑料制品代替玻璃制品。必须使用玻璃器皿时只能用实验室级别的玻璃,任何破碎或有裂痕的玻璃制品均应丢弃。实验过程中不得将注射针作为移液管使用,减少使用注射器和针头。如必须使用注射器和针头时,采用锐器安全装置。严禁重新给用过的注射器针头戴护套。实验中尽量用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管。
7、装有冻干感染性物质安瓿开启与储存
(1)安瓿开启:安瓿开启应在生物安全柜内进行,开启前消毒安瓿外表面。用砂轮在安瓿冻干物远端中部锉一痕迹,取酒精浸泡的棉花将安瓿包起来以保护双手,然后手持安瓿从标记的锉痕处打开。小心移去安瓿顶部,如果安瓿内装有棉花,用消毒镊子除去。弃去物均按污染材料处理。缓慢向安瓿中加入液体来重悬冻干物,避免出现泡沫。
(2)安瓿储存:装有感染性物品的安瓿不得浸入液氮中,以避免有裂痕或密封不严的安瓿在取出时破碎或爆炸。建议将感染性物品真空冷冻干燥,储存于-80℃冰箱或干冰中。从冷藏处取出安瓿时,实验室人员应当进行眼睛和手的防护。
8、感染性物品的操作
(1)血样采集:由受过培训的人员采集病人或动物血样。采集静脉血时,使用一次性安全真空采血管取代传统的针头和注射器。所有操作均必须戴手套。装有标本的试管应置于二级容器中运至实验室,并在实验室内部转运。检验申请单应当分开放置在防水袋或信封内,接收人员不应打开这些袋子。
(2)血清分离:操作人员需经过严格培训。操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置。实验操作中避免或尽量减少气溶胶的产生。血液和血清应小心吸取,不得倾倒。严禁用口吸液。带有血凝块等废弃标本管,加盖后放于防漏容器内高压灭菌。操作前应准备相应种类的消毒剂,用于及时处理可能喷溅和溢出的标本。
(3)涂片、盖玻片、组织及组织切片:用于显微镜观察的血液、唾液、尿液、粪便、分泌物和骨髓标本在固定和染色时,不必杀死涂片上的所有微生物和病毒。所使用的载玻片、盖玻片、染色及洗液等废弃物均应按污染物进行处理,并经相应消毒液浸泡或高压灭菌后再丢弃。组织标本应用甲醛或多聚甲醛固定。应当避免冷冻切片。如果必须进行冷冻切片,应当使用安全罩,操作者要戴安全防护面罩。清除污染时,仪器温度要求升至20℃。
(4)朊蛋白(prion)相关组织:操作过程必须在生物安全柜中进行,在生物安全柜的工作台面使用一次性防护罩。实验人员必须穿戴一次性防护服(隔离衣和围裙)和手套,病理学家应戴特制的具有钢丝网的两层橡胶手套。尽可能地使用一次性塑料器具,使用专用仪器设备,不与其他实验室共用仪器。
含有朊蛋白的组织标本暴露于96%甲酸1小时可以基本失活。实验废弃物,包括一次性手套、隔离衣和围裙,均应当采用多孔负荷蒸汽灭菌器在134～137℃高压灭菌18分钟一个循环,或高压灭菌3分钟六个循环,然后再焚烧。
朊蛋白的感染性废液应当用终浓度含20g/L有效氯的次氯酸钠处理1小时。污染的生物安全柜和其他表面可以采用含20g/L有效氯的次氯酸钠处理1小时来清除污染。不能高压灭菌的用具可以反复用含20g/L有效氯的次氯酸钠润湿超过1小时来进行清洁,并要求用水冲洗以清除残留的次氯酸钠。
操作朊蛋白相关组织还应注意:①钢丝网手套由于不是一次性用品,必须进行污染物的清除。②朊蛋白对紫外线照射也具有抵抗力。虽然甲醛不能有效降低标本中朊蛋白感染性,但安全柜仍必须用标准方法来清除污染(如甲醛蒸气),以灭活可能存在的其他微生物因子。③HEPA过滤器摘除后需要在至少1000℃的温度下焚烧。
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