如果水体被污染,则有可能也被肠道病原菌(沙门菌、志贺菌、弧菌、肠道病毒等)污染而引起肠道传染病。由于肠道病原微生物在水中数量很少,故从水体特别是饮用水中分离病原菌非常困难。大肠菌群是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一类细菌,所以常将其作为粪便污染的指示菌,即根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否受粪便污染。目前,世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪便污染较好的指示菌,我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌。根据我国多年供水实践,同时确保在流行病学上的安全,饮用水标准限值为每100mL中不得检出。
总大肠菌群的检验方法有两种:一种是多管发酵法可适于各种水样、底泥,但操作较复杂,需时间较长;另一种是滤膜法,主要适用于杂质较少的样品,操作较简单快速,特别适用于自来水厂作为常规检测之用。
(1)多管发酵法,多管发酵法是根据大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气的特性进行检验的。
多管发酵时所用的培养基是乳糖蛋白胨培养液。即将蛋白胨、乳糖、牛肉膏、盐加热溶解在一定量的蒸馏水中,调整pH值到7.2~7.4。再加1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL,充分混匀,分装于置有倒管的试管中。灭菌,冷藏备用。设计依单眠为发酵时,以无菌操作方法将10mL水样加入盛有培养液的试管中,混匀后置于37℃恒温培养箱中培养24h。将发酵后的发酵管接种于品红亚硫酸钠培养基(蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、无水亚硫酸钠、碱性品红乙醇溶液加一定量蒸馏水制成),再置于37℃恒温箱内培养18~24h,挑选符合下列特征的菌落:紫红色,具有金属光泽的菌落;深红色,不带或略带金属光泽的菌落;淡红色,中心色较深的菌落。
取菌落的一小部分进行涂片,革兰染色,镜检。
凡系革兰染色阴性的无芽孢杆菌,再接种于普通的乳糖蛋白胨培养液中(内有倒管)经37℃恒温培养24h,有产酸产气现象,即判定为大肠菌群阳性。
(2)滤膜法将水样注入已灭菌的放有微孔滤膜(孔径0.45μm)的滤器中,经过抽滤,细菌即被截留在膜上,然后将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上,进行培养。再计数与鉴定滤膜上生长的大肠菌群,计算出每1L水样中含有的大肠菌群数。如有必要,对可疑菌落应进行涂片染色镜检,并再接种乳糖发酵管做进一步鉴定。
滤膜法具有高度的再现性,可用于检验体积较大的水样,比多管发酵法能更快地获得肯定的结果。不过在检验浑浊度高、非大肠杆菌类细菌密度大的水样时,有其局限性。
对水中大肠菌群数与病毒检出率之间的关系进行了研究,发现水样中大肠菌群数越多,水样的病原微生物阳性检出率相应越高,具体关系列于表中。
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