水质粪大肠菌群的测定滤膜法（三）

9.2培养

用灭菌镶子夹取滤膜移放在MFC培养基（6.1）上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培 养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将培养皿倒置，放入恒温培养箱内,44.5°C ±0.5°C 培养 24h±2h。

9.3对照试验
3. 1空白对照

每次试验都要用无菌水（6.3）按照步骤9.1和9.2进行实验室空白测定。

9. 3. 2阳性及阴性对照

将粪大肠菌群的阳性菌株（如大肠埃希氏菌Escherichia coli）和阴性菌株（如产气肠杆 菌Enterobacter aerogenes）制成浓度为40~600 CFU/L的菌悬液，分别按照9.1~9.2步骤培养， 阳性菌株应呈现阳性反应，阴性菌株应呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应查 明原因后重新测定。

10结果计算与表示

10. 1结果判读

MFC培养基上呈蓝色或蓝绿色的菌落为粪大肠菌群菌落，予以计数。

MFC培养基上呈灰色、淡黄色或无色的菌落为非粪大肠菌群菌落，不予计数。 结果判读参考图片见图1。


无菌落生长
 
图1结果判读参考图片

10.2结果计算

样品中的粪大肠菌群数（CFU/L），按照公式（1）进行计算:

八 Ci*1000C =

式中：C——样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
Ci——滤膜上生长的粪大肠菌群菌落总数，个；
1000——将过滤体积的单位由ml转换为L ；
/——样品接种量，ml；

注：若平行样结果都在20〜60 CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。

10.3结果表示

测定结果保留至整数位，最多保留两位有效数字，当测定结果N100CFU/L时，以科学 计数法表示。粪大肠菌群检验记录及报告格式参见附录A。

11精密度和准确度

11.1精密度

6个实验室对低浓度（地下水，浓度均值为2.0X10² CFU/L）、中浓度（地表水，浓度 均值为

1.6X105CFU/L）和髙浓度（生活污水，浓度均值为1.6X10⁷ CFU/L）三个不同浓度 粪大肠菌群的实际

样品和有证标准样品（浓度为3670 MPN7L,可接受范围为330〜 7710MPN/L）进行了6次重复测定：
实验室内相对标准偏差范围分别为5.3%〜12%、0.81%〜 2.1%、0.51%〜4.2%和7.7%〜9.8%；实验室间相对标准偏差分别为6.8%、3.9%、4.0%和3.6%； 实验室间95%置信区间见表2 o

表2实验室间95%置信区间

 
11.2准确度

6个实验室对含粪大肠菌群浓度为3670MPN7L （可接受范围为330-7710 MPN/L）的标 准样品进行了6次重复测定：相对误差范围为-19%〜-32%；相对误差最终值为：-23%±10%。

注：微生物检测数据为偏态分布，其测定结果全部经以10为底对数转换后进行计算。

12质量保证和质量控制

12. 1培养基检验

更换不同批次培养基时要进行阳性和阴性菌株检验，将粪大肠菌群测定的阳性菌株（如 大肠埃希氏菌Escherichia coli）和阴性菌株（如产气肠杆菌Enterobacter aerogenes）配成适 宜浓度，按样品过滤（9.1）的要求使滤膜上生长的菌落数为20〜60个，然后按培养（9.2）的要求进行操作，阳性菌株应生长为蓝色或蓝绿色菌落，阴性菌株应生长为灰色、淡黄色、 无色或无菌落生长。否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。

12.2对照试验

12.2. 1空白对照

每次试验都要用无菌水做实验室空白测定（9.3.1）,培养后的培养基上不得有任何菌落 生长。否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。

12.2.2阳性及阴性对照

定期按照9.3.2进行阳性及阴性对照试验，阳性菌株应呈现阳性反应，阴性菌株应呈现 阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。

13废物处理

使用后的废物及器皿须经121°C髙压蒸汽灭菌30 min或使用液体消毒剂（自制或市售） 灭菌后，器皿方可清洗，废物作为一般废物处置。

14注意事项

当样品浑浊度较高时，应选用其他方法。

附录A
（资料性附录）
粪大肠菌群检验记录及报告格式

表A. 1粪大肠菌群测定检验记录

检验者：校对：审核:
 
注：可根据实际工作需要自行设计表格，至少要包括上述信息。
 

表A. 2粪大肠菌群测定数据报告格式

注：可根据实际工作需要自行设计表格，至少要包括上述信息。