化学鉴别法系指根据药物与化学试剂在一定条件下发生离子反应或官能团反应,产生不同颜色、生成不同沉淀、呈现不同荧光或放出不同气体等现象,从而作出定性检测结论。如果供试品的鉴别试验结果与质量标准中的定相符,则可认为该项鉴别试验符合规定”,或称为“阳性反应”。化学鉴别法是药物检测中最常用的鉴别方法。化学鉴别法又分为一般鉴别试验和专属鉴别试验。
一、一般鉴别试验
般鉴别试验是验证药物是否呈现某一离子或基团共有的化学反应在质量标准中,
一般描述为“本品显某某鉴别反应”,如,“本品显芳香第一胺类的鉴别反应本品显氯化物的鉴别反应”。一般鉴别试验只能证实供试品是否是某一类药物,不是对未知药物进行定性检测。对无机药物是根据其组成的阴、阳离子的特殊反应进行鉴别,对有机药物则大都采用典型的官能团反应进行鉴别。
一般鉴别试验的具体方法收载在《中国药典》附录中《中国药典》二部附录Ⅲ“一般鉴别试验”中共收载了丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、无机金属盐类(如钠盐、钾盐)有机酸盐类(如水杨酸盐、枸橡酸盐)等35个一般鉴别试验项目。下面主要介绍其中具有代表性的6个鉴别试验。
1.芳香第一胺类的鉴别
(1)方法:取供试品约50mg,加稀盐酸1ml,要时缓缓煮沸使溶解,放冷,加0.1mol/L亚硝酸钠溶液数滴,滴加碱性B-萘酚试液数滴,视供试品不同,生成由橙黄到猩红色沉淀。
(2)原理:芳香第一胺类药物或水解后能生成芳香第一胺类的药物,均可与亚硝酸钠发生重氮化反应,生成的重氮盐与碱性B-萘酚形成偶氮化合物,视供试品不同,颜色从橙黄色到猩红色。
2.水杨酸盐的鉴别
(1)方法
1)取供试品的稀溶液,加三氯化铁试液1滴,即显紫色。
2)取供试品溶液,加稀盐酸,即析出白色水杨酸沉淀;分离,沉淀在醋酸铵试液中溶解。
(2)原理:本品在中性弱酸性条件下,与三氯化铁试液反应生成有色配位化合物、在中性时呈红色,弱酸性时呈紫色。
在酸性条件下,本品生或在水溶液中微溶的有机酸水杨酸,析出白色沉淀;醋酸铵为强电解质,在水溶液中显中性微溶的水杨酸在醋酸试液中能够完全电离,从而溶解。
3.丙二酰脲类的鉴别
(1)方法
1)供试品约01g,加碳酸钠试液m与水10ml2分钟,滤过,滤液中逐滴加入硝酸试液,即生成白色沉淀,振摇,沉淀即溶继续加过量的硝酸银试液沉淀不再溶解。
2)取供试品约50mg,加溶液(1→10)5ml,溶解后,加铜试液1ml,即显紫色或生成紫色沉淀。
(2)原理:巴比妥类药物是丙二酰的衍生物,具有丙二酰的鉴别反应。
1)与硝酸银的反应:丙二酰
在碳酸钠试液中形成钠盐面溶解,再与硝酸银试液作用,先生成可溶性的一银盐,继而生成不溶性的二银盐白色沉淀。
2)与铜啶的反应:硫酸铜溶于水后,加吡啶,生成硫酸二吡啶铜,即为铜吡啶试液。丙二酰脲类能与铜啶试液作用而显紫色或产生紫色沉淀。
4.钠盐的鉴别
(1)方法
1)取铂丝,用盐酸湿润后,蘸取供试品,在无色火焰中燃烧,火焰即显鲜黄色
2)取供试品约100mg,10ml试管中,加水2ml溶解,加15%碳酸钾溶液2m,加热至沸,应不得有沉淀生成;加焦锑酸钾试液4ml,加热至沸;置冰水中冷却,必要时,用玻棒摩擦试管内壁,应有致密的沉淀生成。
(2)原理:在低温条件下,钠离子与焦锑酸钾试液生成致密的沉淀物。2Na+k2h2Sb2O2→2k+na2H2Sb2O2↓
5.氯化物的鉴别
(1)方法
1)取供试品溶液,加稀硝酸使成酸性后,滴加硝酸银试液,即生成白色凝乳状沉淀;分离,沉淀加氨试液即溶解,再加稀硝酸酸化后沉淀复生成。如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐,须先加氨试液使成碱性,将析出的沉淀滤过除去,取滤液进行试验。
2)取供试品少量,置试管中,加等量的二氧化锰,混匀,加硫酸湿润,缓缓加热,即发生氯气,能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。
(2)原理:在酸性条件下,氯离子与银离子生成氯化银白色凝乳状沉淀,该沉淀与氨试液能发生配位反应,生成易溶的银氨配离子化合物该配合物在酸性环境下配位平衡被破坏,生成游离态银离子,与氯离子重新生成氯化银白色凝乳状沉淀。
二氧化锰具有氧化性,在酸性并加热条件下能够将氯离子氧化生成氯气。氯气能氧化湿润碘化钾淀粉试纸中碘化钾,生成碘单质,使该试纸变蓝。
6.硫酸盐的鉴别
(1)方法
1)取供试品溶液,加入氯化试液产生白色沉淀,分离沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。
2)取供试品溶液,加入酸铅试液产生白色沉淀,分离,沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解
(2)原理:硫酸根离子与钡离子结合生成难溶的白色硫酸钡沉淀。
硫酸根离子与铅离子结合生成难溶的白色硫酸铅沉淀,该沉淀与醋酸根离子发生配位反应,生成易溶于水的弱电解质醋酸铅;若该沉淀处于过量碱性氢氧化钠溶液中,会与氢氧根离子发生配位反应溶解,从而使沉淀消失。
二、专属鉴别试验
专属鉴别试验是根据药物化学结构上某些基团所具有的特有化学性质和专属反应而进行的鉴别试验。专属鉴别试验收载在药品质量标准正文中。
如氢溴酸山莨菪碱的鉴别方法为:取本品约10mg,加发烟硝酸5滴,置水浴上蒸干,得黄色残渣放冷,加乙醇2～3滴湿润加固体氢氧化钾一小粒,即显深紫色
该反应为维他立(Vili)反应,是阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱等含莨菪酸的托烷类生物碱的特征反应。供试品与发烟硝酸共热,生成黄色三硝基(或二硝基)衍生物,冷却至室温后,遇醇制氢氧化钾即生成深紫色的醌型化合物。又如,异烟鉴别方法为:取本品约10mg,置试管中,加水2ml溶解后,加氨制硝酸银试液1ml,即发生气泡与黑色浑浊,并在试管上生成银镜。
因为异烟肼结构中的肼基具有强还原性,与氨制硝酸银试液反应,能够将银离子还原生成单质银,发生银镜反应。
专属鉴别试验实例还可参阅本教材第八章各节内容,如维生素B1的硫色素反应、盐酸氯丙嗪的硝酸氧化显色反应等。
综上所述,一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构为依据,根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别,以区别不同类别的药物;而专属鉴别试验则是在一般鉴别试验的基础上,利用各种药物的化学结构差异引起的性质差异来鉴别药物是否具有特殊基团或特殊化学结构,达到最终确证药物真伪的目的。
三、注意事项
1.进行鉴别试验之前,必须明确鉴别试验的工作要求,了解药物的性质,掌握鉴别试验的方法与原理。
2.所用仪器要求洁净。试药应符合《中国药典二部附录要求,试液除另有规定外,均应按规定的方法配制和贮藏。
3.供试品或供试品溶液的取用量应按各药品项下的规定,固体供试品应研成细粉;液体供试品如果太稀可浓缩,如果太浓可稀释。
4.试药和试液的加入量、方法和顺序均应符合各试验项下的规定。如未作规定,试液应逐滴加入,边加边振摇,并注意观察反应现象。
5.试验中需要蒸发时,应置于蒸发皿中在水浴上进行。需分离沉淀时,采用离心机分离,经离心沉降后,用吸出法或倾泻法分离沉淀。
6.对反应不够灵敏的试验,可用对照品进行对照试验。
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