1．原理
利用费林溶液与还原糖煮沸，生成氧化亚铜沉淀的反应，以次甲基蓝为指示液，以样品或经水解后的样品滴定煮沸的费林溶液，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色，以示终点。根据样品消耗量求的总糖或还原糖。改进后在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，可反应生成氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾发生络合反应，形成可溶性络合物，消除红色沉淀对滴定终点观察的干扰，使终点变色明显。
2．试样和材料
2.1盐酸溶液(1+1)。
2.2氢氧化钠溶液：200g。
2.3标准葡萄糖溶2.5g/L：精确称取2.5g（称准至0.0001g）在105℃～110℃烘箱内烘干3h，并在干燥箱中冷却的葡萄糖用水溶解并定容至1000ml。
2.4 次甲基蓝指示液10g/L：称取1.0g次甲基蓝溶解于水中，稀释至100ml。
2.5 费林氏溶液
a)配制：按GB/T603-2002配制。同改进后在费林氏碱性酒石酸铜乙液时，每升加入铁氰化钾4g。
b)标定预备试验：吸取费林溶液甲乙液各5.00mL于250mL瓶中，加50mL，摇匀，在电炉上加热至沸腾，在沸腾状态下用制备好葡萄糖标准溶液滴定，当溶液蓝色将消失呈红色时，加2滴次甲基蓝指示液，继续滴定至蓝色消失，呈无色或淡黄色。记录消耗葡萄糖标准溶液体积。
c) 正式试验：吸取费林溶液甲乙液5.00mL于250瓶中，加50mL和比预备试验少1mL葡萄糖标准溶液，加热至沸腾，并保持2min，加2滴次甲基蓝指示液，一定在沸腾状态中1min内用葡萄糖标准溶液滴至终点，记录消耗葡萄糖标准溶液总体积（V）。
d)计算
式中：F—相当于萄萄糖的克数g；m—称取无水葡萄糖质量g；V—消耗萄萄糖标准溶液的总体积ml。
3．样品的制备
3.1 测定总糖用试样：准确吸取一定量的样品（V1）于100ml容量瓶中，含总糖量为0.2 g～0.4g，加5mL酸溶液(1+1),加水至20mL摇匀。于68+1℃水浴锅上水解15min，取出冷却。在酸度计上用200g/L氢氧化钠溶液中和至中性，调温至20℃，加水定容至刻度（V2）。
3.2 测还原糖用试样：准确吸取一定量的样品（V1）于100ml容量瓶中，含还原糖量为0.2 g～0.4g，加水定容刻度。
4．分析步骤
试样代替葡萄糖标准溶液，按2.5b同样操作，记录消耗试样的体积（V3），结果按照公式（4）计算。
测定干葡萄酒样品2.5b操作时，正式滴定需要用葡萄糖标准溶液滴定至终点。结果按照公式(5)计算。
式中X—还原糖的含量g/L；
F—费林氏液甲乙各5mL相当于葡萄糖克数g；
V1—样品的体积mL；
V2—释后或水解定容样品的体积mL；
V3—样品的体积 mL；
G—葡萄糖标准溶液的准确浓度g/ mL；
V—葡萄糖标准溶液的体积mL；
所得结果应表示至一位小数。
5．精密度
在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的2%。
结论讨论：加入亚铁氰化钾目的是使费林溶液与试样中还原糖生成氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾发生络合反应，形成可溶性络合物，消除红色沉淀，使终点变色明显。试验原理未变，终点判定未改变，不影响检测结果。改进后终点易于观察，结果准确可靠。
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