做多肽药物时遇到下列问题:1)基线不稳定波动大,流动相 A :1%TFA 水溶液 B:1%TFA 乙腈溶液检测波长 210nm 流速 1.0ml/ml 什么原因?怎么解决?TFA 有什么作用?流动相中不加 TFA 见不到主峰,基线良好。2)做完肽类样品时怎么冲洗 C18 比较好;3)药典上介绍测定分子量大于 2000 的样品,选择柱子填料的孔径为 30nm,30nm 与 10nm 对结果有什么区别?
答:应该是起 “离子对” 的作用吧。在做多肽类样品的时候,300A 孔径的填料相对 100A 孔径肯定要选择性好点,也就是分离度相对比较好点。流动相加入 TFA,在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中,使用三氟乙酸(TFA) 作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用,来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。
三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发,可以方便地从制备样品中除去。另一方面,三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm ,对多肽在低波长处的检测干扰很小。
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