抗溶血性链球菌“o”试验的检查过程

　　1、化验取材：血液

　　抗溶血性链球菌“O”试验的原理：链球菌溶血素O对氧不稳定，在空气中迅速失去溶血活力，检测ASO时，先将链球菌溶血素O还原，恢复其溶血活力，再与不同稀释度的病人血清混合，继加O型红细胞或兔红细胞悬液作为指示剂。如溶血素O被血清中的相应抗体所中和，则加入的指示红细胞不被溶解。如血清中无相应抗体或抗体量不足以中和加入的溶血素，则发生不同程度的溶血现象。

　　2、试剂：

　　（1）溶血素O：有商品供应，按说明书稀释后使用，溶血素O活性（结合单位）的标定必须用丹麦国立血清研究所制备的WHO标准抗溶血素O抗体精确滴定。溶血素O对热不稳定，短期保存可存放于4～10℃冰箱，几个月以上应低温冰冻贮存。

　　（2）ASO缓冲液：取磷酸氢二钠十二水合物9.06g，磷酸二氢钠二水合物10.89g，氯化钠4.6g，使溶于少量蒸馏水后并补足至1000ml，pH值为6.5。

　　（3）红细胞悬液：取枸橼酸钠抗凝的兔或O型人血，用ASO缓冲液洗涤3次，最后1次洗涤后，必须经2000r/min离心10～15min，离心后尽可能吸尽无色的上清液，并以ASO缓冲液配制成5%悬液，用时轻轻摇匀。

　　（4）还原剂：商品还原片剂可按说明书使用，其主要成分是2∶1的无水亚硫酸氢钠和无水亚硫酸钠。也可在临用前将ASO缓冲液以2mol/L氢氧化钠校pH值到8.0，加入L-半胱氨酸盐7g/L使溶解即成。

　　3、操作方法：

　　（1）用ASO缓冲液将血清标本稀释成1∶100和1∶500二个稀释度。

　　（2）按说明书建议配制1结合单位/ml的还原溶血素O，准确吸取一定量溶血素，首先用还原剂溶液稀释到最终体积的1/3左右，放置15min，使溶血素充分还原，然后准确稀释到指定体积，在45min内使用。

　　（3）取70×100mm小试管，并以已知ASO单位的标准血清作对照。

　　（4）结果报告：主要观察上清液是否有溶血现象，以呈完全不溶血的血清最高稀释倍数为该标本的ASO单位/ml。