因为模板质量问题。
1）模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以跑个电泳看看提取的DNA，PCR阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定是这种问题，可以增加模板量试试，但不一定行得通。
2）模板里面残留某种试剂成份，可能抑制Taq聚合酶的活性，如果是这种情况，可以用试剂盒把模板再纯化一下，或将模板做个梯度稀释以确定最佳的模板量。
数字pcr仪是分子诊断实验室的重要工具，直接影响临床检测结果的准确性、重复性、甚至工作效率。其主要用于科研及临床的基因扩增定性PCR基因扩增荧光/酶免终点定量DNA基因扩增基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增适合国内外各种PCR试剂盒传染病类、科研类等。
模板浓度过低：
退火温度过高。有可能，可以做个梯度PCR试一下。
dNTP浓度低时PCR产率及特异性均增高，适合于用扩增掺入法标记生物素及放射性元素。当100μl PCR液中含dNTP各40μmol/L时就足以合成2.6μg的DNA（dNTP消耗一半）,所以,你不小心多加了4倍的量,会很影响PCR结果,即Taq酶活力要降低20～30%，即底物抑制。
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