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构建重组载体时用两种限制酶切割目的基因的原因

2022.3.04
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超级艾蛋木啊

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(1)如果将抗虫基因直接导入棉花细胞,由于该基因上缺少复制原点以及启动子和终止子,因此在棉花细胞中不能稳定存在并复制和表达,因此一般情况下,棉花不会具有抗虫特性,需要构建基因表达载体.
(2)质粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三种限制酶切割位点,其中BamHI的切割位点位于目的基因上,用该酶切割会破坏目的基因;若只用SalI一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接;因此在构建重组质粒时,应选用SalI和HindIII两种限制酶对质粒和抗盐基因进行切割,以保证重组DNA序列的唯一性.
(3)用SalI和HindIII两种限制酶对质粒进行切割时,会破会四环素抗性基因,但不会破坏氨苄青霉素抗性基因,因此导入重组质粒的农杆菌能在含有氨苄青霉素的培养基上能生存,但不能在含有四环素培养基上生存,所以培养基A和培养基B分别还含有氨苄青霉素、四环素,含目的基因的是4和6菌落中的细菌.探针是指用放射性同位素标记的目的基因(抗盐基因).除了从分子水平上进行检测,还可以从个体水平上进行鉴定,即用一定浓度的盐水浇灌烟草植株来鉴定烟草的耐盐性.
(4)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用采用植物组织培养技术,先经过脱分化形成愈伤组织,愈伤组织再经过增殖和分化形成完整的植株.此过程除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素(生长素和细胞分裂素).
(5)科学家通常将目的基因导入到植物细胞的线粒体(或叶绿体)中,这样植物产生的花粉粒中将不含目的基因,能够防止转基因作物的目的基因通过花粉传递给近缘物种.
故答案为:
(1)稳定存在并复制和表达
(2)Sal I Hind III
(3)氨苄青霉素 四环素 4和6 抗虫基因的DNA片段 抗虫的接种实验
(4)再分化 植物激素(生长素和细胞分裂素)
(5)线粒体(或叶绿体)

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