注意事项
1、免疫透射比浊法：
（1）关于抗血清：比浊测定与其他方法相比对抗血清的要求更高。比浊法以用多克隆抗体为宜。抗血清中必须不含杂抗体。必须十分重视从人血清中提取的apoA-Ⅰ达到免疫纯、色谱纯与电泳纯，这不是一般实验室都能做到的。抗血清效价（滴度）不可低于16。目前国内某些商品试剂中，apoA-Ⅰ抗血清效价极低，选购试剂盒时必须注意。如果没有在选购前鉴定抗血清质量的经验，应请有条件的单位鉴定之。
（2）上法中标本（血清）稀释200倍是为了便于手工操作（加样100μl），如有精密加样器，可作20倍稀释（用10μl）。为了适合不同实验室的条件（如不同类型的自动化仪器），作适当修改时应注意抗原抗体的比例，必须十分注意反应体系中不可有抗原过量，线性上限不可低于2.5g/L。换言之，抗血清用量必须充裕，否则标本中apoA-Ⅰ高水平时测出结果偏低。目前国内某些商品试剂盒不但抗血清效价过低，操作中所定标本用量又过大（如3～5μl），抗体明显不足，测出结果必然不准确。
（3）为了达到准确测定的目的，apoA-Ⅰ与B比浊测定（终点法）中必须作校准曲线计算结果。一定范围（低标本用量）浓度（X）与浊度（Y）基本上成直线关系，直线回归计算出在Y轴上有一定截距（A值<0.1），所以用单点校准计算结果偏差较大，使测出结果不能准确反映浓度的高低（高的偏低，低的偏高）。千万不要因为单点法简便而忽略了测定的准确性。无论用何种自动化仪器，必须先试作校准曲线。如果在所用仪器及特定条件下反复测试，回归线的截距不明显时，才能采用单点校准法。标本用量在3～5μl时，即使加大抗血清用量，浓度与浊度也不成直线关系，只能用曲线直线化转换后计算。
（4）主要干扰因素是血清本身的混浊（如高脂血清），用超离心或脂肪酶水解等标本预处理方法都不实用。用表面活性剂消浊的作用也有限，所以在测定中必须作标本空白管。除了自动分析中可采用两点法外，手工法用单一试剂而不扣除标本空白的做法是错误的。为了减少基质效应对浊度反应的影响，必须用定值血清作校准物。此外，尘埃粒子、比浊皿划痕等干扰也必须排除。
（5）有的商品试剂盒（包括某些进口产品）所附校准血清定值不准确，是误差的重要来源。
2、火箭电泳法：
（1）抗原稀释倍数与抗血清用量的选择，应以火箭峰清晰、校准曲线斜率适中并成直线为宜。本法同时测定apoA-Ⅰ与apoB，应调整两种抗血清用量，使二者峰高有区别，apoB峰高不小于1cm。
（2）不同种类来源的抗血清（如兔与羊），在等效价的情况下进行试验，结果会有差异。apoA-Ⅰ测定以兔抗血清为好。用兔血清时峰形尖细，而羊血清所产生的峰粗，峰尖圆钝，有时在峰顶前出现虚影。校准血清所作校准曲线斜率也不同。但不论用何种抗血清，定量结果差别不大。
（3）在一定条件下电泳，不同稀释度校准血清的峰高不会有明显变动，校准曲线斜率基本一致。如标本峰高超出校准曲线范围时，应调整标本稀释倍数后重测。板间CV通常小于5%。
（4）火箭电泳结果可以用染色法或直接肉眼观察可见的火箭峰。前者用标本少，节省抗血清，但如适当增加标本及抗血清用量，不染色更为方便。所用琼脂糖应为标准电渗或低电渗的，凝胶中加入适量葡聚糖或聚乙二醇可使火箭峰更清晰。
（5）火箭峰的测量可以计算面积或峰高，面积是峰高乘以峰宽（峰半高处的宽度）。测量精度最好能达0.1mm。须用机械或电子放大设备。标准曲线范围内峰高以1～4cm为宜。
（6）本法适用于少量标本分析。也适用于apoAⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E及Lp（a）测定。
检查过程
1、免疫透射比浊法：
（1）标本应是及时分离的空腹血清，可密封存放在2～6℃冰箱中，1周内测定，-20℃可存放半年。
（2）用全自动分析仪时，应根据不同仪器设计参数，合理选择抗原抗体比例及反应时间。也可作速率法散射比浊测定CM如用Beckman比浊仪ICS或protein array system）。
（3）手工法所用仪器：精密光度计，具有340nm滤光片（或分光器），样品池体积以0.5ml为宜（为节省抗血清），最好用流动杯，样品稀释最好用稀释器、经校正的加样器。
（4）标本处理：将血清标本及质控血清各用样品稀释剂作1：200稀释，即先作1：20稀释（5.Oμl血清+95μl稀释剂）后，再作1：10稀释（多余的1：20血清作测定apoB用）。
混匀后，25～37℃放置30min，在波长340nm比浊，根据U-UB的A值，在标准曲线上读出结果。
本法批间CV<5%。
（5）校准曲线：在手工与半自动操作中每批测定均需作校准曲线，可将校准血清稀释成1：100、1：200、1：300和1：400等4种浓度，与标本同样操作，根据定值计算出每个标准管CM浓度，以浓度（X）与其相应的A值（Y）作图（用直线回归计算），基本上成直线，但在Y轴上有一定截距，所以不能用单点标准。操作准确时浓度与A值的相关系数应在0.985以上。
如有高、中、低浓度的三份校准血清时，可与标本同样操作，做三点定标，也可作五点定标（即高、中浓度的血清等量混合，及中、低浓度的血清等量混合，成为另两份校准血清）。
本法线性范围：0.4～2.5g/L。
2、火箭电泳法：
（1）浇板：每板用10g/L琼脂糖10ml，沸水浴中融化，混匀，冷至50～55℃时加入CM抗血清50μl，apoB抗血清8μl（用量视抗血清效价而定），迅速混匀后倒在预置在水平台上的玻璃板上，冷后放在4℃，20min后打孔，孔在板的阴极端，孔径3mm，孔间距至少5mm，孔容量5μl。把板放入电泳槽，用滤纸搭桥。
（2）稀释抗原：用0.15mol/L NaCl液将校准血清稀释成1：100，1：150，1：200，1：300，及1：400（作校准曲线之用），血清标本按1：200稀释，放4℃冰箱不得超过3天。
（3）加样：在低电流状态（10mA/板）将稀释好的定值血清及标本分别吸取5μl（准确），加入琼脂糖凝胶加样孔内。每板都要做一系列标准。
（4）通电：稳流24mA/板，端电压6～8V/cm，以流水冷却使琼脂糖保持15℃，电泳3～4h。
（5）脱杂蛋白及制干胶膜：电泳后的琼脂糖板浸泡在0.15mol/L NaCl中30min，将胶膜托置于聚酯薄膜上，用多层滤纸在轻轻加压下吸干胶内水分，然后将滤纸、胶膜与聚酯膜三者一起自然干燥，或用热吹风器吹干，干后胶膜会自然与滤纸及聚酯膜分开。
（6）染色：将琼脂糖胶膜平铺浸泡于染色液内20～30min。
（7）脱色：用脱色液浸泡已染色的胶膜至火箭峰清晰，背景基本无色。可在水中用两片玻璃纸将胶膜夹住，晾干后可长期保存。也可以用流水浸泡脱色至背景干净。
附注：
①抗原稀释倍数与抗血清用量的选择，应以火箭峰清晰、校准曲线斜率适中并成直线为宜。本法同时测定apoA-Ⅰ与apoB，应调整两种抗血清用量，使二者峰高有区别，apoB峰高不小于1cm。
②不同种类来源的抗血清（如兔与羊），在等效价的情况下进行试验，结果会有差异。apoA-Ⅰ测定以兔抗血清为好。用兔血清时峰形尖细，而羊血清所产生的峰粗，峰尖圆钝，有时在峰顶前出现虚影。校准血清所作校准曲线斜率也不同。但不论用何种抗血清，定量结果差别不大。
③在一定条件下电泳，不同稀释度校准血清的峰高不会有明显变动，校准曲线斜率基本一致。如标本峰高超出校准曲线范围时，应调整标本稀释倍数后重测。板间CV通常小于5%。
④火箭电泳结果可以用染色法或直接肉眼观察可见的火箭峰。前者用标本少，节省抗血清，但如适当增加标本及抗血清用量，不染色更为方便。所用琼脂糖应为标准电渗或低电渗的，凝胶中加入适量葡聚糖或聚乙二醇可使火箭峰更清晰。
⑤火箭峰的测量可以计算面积或峰高，面积是峰高乘以峰宽（峰半高处的宽度）。测量精度最好能达0.1mm。须用机械或电子放大设备。标准曲线范围内峰高以1～4cm为宜。
⑥本法适用于少量标本分析。也适用于apoAⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ、D、E及Lp（a）测定。
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