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细胞培养技术的生存期的相碰介绍

2022.3.19
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

  “ 一代”指细胞接种到分离再培养的所用的时间。与细胞倍增一代不是一个含义。在细胞一代中,细胞能倍增3~6次,经历三个阶段:

  1. 潜伏期(latent phase) :

  接种 经过 悬浮期(细胞质回缩,胞体呈圆球形) 贴壁。

  初代培养细胞 经过 10~24小时或更多时间。

  连续细胞系和癌细胞系 经过 10~30分钟 贴附。

  贴附现象是一个非常复杂和受多种因素的影响。

  影响细胞贴附:底物表面不干净,影响细胞贴附。

  利于细胞贴附:底物表面带有阳性物质与特殊物质:

  纤粘连蛋白(fibronectin FN)、

  细胞表面蛋白(cell surface proteinCSP)

  这些物质有的存在与细胞表面,有的来自血清。

  潜伏期特点:

  长短与细胞接种密度、种类、使用的培养基性质有关。

  (1)细胞贴附后进入潜伏期,细胞无增殖。少见分裂相,细胞有运动活动。

  (2)初代培养 细胞潜伏期约为24~96小时或更长,

  连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期约6~24小时。

  (3)细胞接种密度大潜伏期短。

  (4)细胞出现分裂相增多时,标志细胞进入指数增生期。

  2.指数增生期(logarithmic growth phase):

  特点:细胞增殖最旺盛阶段,分裂相增多。

  细胞分裂指数(mitotie index MI) :

  表示每1000个细胞中的分裂相数。

  条件:分裂相数与细胞种类、培养成分、pH培养箱温度有关。

  细胞分裂指数:

  初代细胞:在0.1%~0.5%之间% ,

  连续分裂细胞和肿瘤细胞:3 ~5%。

  指数增生期是作为细胞一代活力最好的时期,是进行实验最好和最主要的阶段。

  指数增生期持续3~5天,细胞数量增多后生长空间变小,细胞相互接触可连接成片。

  正常细胞:细胞相互接触能抑制细胞运动,这种现象称为接触抑制(contact inhibition)。

  肿瘤细胞:没有这种现象,可作为区别正常与肿瘤细胞的标志之一。当肿瘤细胞达到一定密度后向三维空间发展,使细胞发生堆积(piled up)。

  由于细胞不断增殖分裂,细胞数量持续增多,培养液的营养成分减少,代谢产物增多,细胞受营养的枯竭和代谢物的影响,则发生密度抑制(Density inhibition),导致细胞分裂停止。

  3.停滞期(stagnate phase)

  细胞量和密度达到饱和,细胞停滞增殖。表明细胞进入到停滞期,细胞数量持平,也称为平顶期(plateau)。

  特点:细胞不增殖,有代谢活动。培养液中的营养已逐渐耗尽,代谢产物积累增多,pH降低,此时需要传代,否则细胞将会中毒,发生形态改变,细胞会从底物脱落死亡。

  注意:

  传代过晚将影响下一代细胞的生长,至少要再传 1~2代 ,通过换液淘汰死细胞和受损较轻的细胞。待细胞全部恢复后再用。

  在这一点上要特别注意。

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