两性电解质在电泳场中形成一个pH梯度，由于蛋白质为两性化合物，其所带的电荷与介质的pH值有关，带电的蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移，当到达其等电点（此处的pH值使相应的蛋白质不再带电荷）时，电流达到最小，不再移动。本法用于检测蛋白类和肽类供试品的等电点。
除另有规定外按以下方法测定。
1. 仪器装置 恒压或恒流电源、带有冷却装置的水平电泳槽和制胶模具。
2. 试剂
（1）水 （电阻率应不低于18MΩ·cm）
（2）A液 称取丙烯酰胺5.0g，亚甲基双丙烯酰胺0.15g，加适量水溶解，并稀释至50ml，双层滤纸滤过，避光保存。
（3）B液 10%过硫酸铵溶液，新鲜配制。
（4）甲基红试液 称取5mg甲基红，溶于10mL 0.05mol/L氢氧化钠中。
（5）50%甘油
（6）正极液 0.5mol/L磷酸溶液
（7）负极液 1mol/L 氢氧化钠溶液
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