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等电聚焦水平板电泳法的固定和染色的介绍

2022.3.22
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

  一、固定和染色

  (1)试剂

  a. 固定液 20%三氯醋酸

  b. 染色液 i) 染色储备液 称取1.0gG-250,溶于20ml水中,为溶液1;称取125g(NH4)2SO4,溶于400ml水中,为溶液2;称取20g H3PO4,为溶液3;将溶液3加入到溶液1中,待G-250完全溶解后 ,与溶液2混合,并加水至1L,混匀后即得,用前应充分混合。

  ii) 工作染色液 取60ml染色储备液,与30ml甲醇混匀,新鲜配制。

  c. 脱色液 蒸馏水

  (2)固定与染色 电泳完毕后,取出胶片,置于固定液中固定20分钟以上,取出胶片,置染色液中3小时,用脱色液脱色至背景透明后取出晾干,亦可做成干胶永久保存。

  二、结果判断

  将胶片置凝胶电泳扫描仪中扫描,通过扫描定位法测量蛋白质或多肽与等电点标准的迁移距离。

  (1)鉴别 供试品主成分迁移位置应与对照品迁移位置一致。

  (2)等电点 以等电点标准试剂中各种蛋白的等电点(pI)对其相应的迁移距离直线回归作图;将供试品的迁移距离代入直线回归方程,求出供试品的等电点。

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