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脾B细胞+骨髓瘤细胞,加聚乙二醇(PEG)促进细胞融合,HAT培养基中培养(内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T)生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。细胞融合物中包含:脾-脾融合细胞:不能生长,脾细胞不能体外培养。骨-骨融合细胞:不能利用次黄嘌呤,但可通过第二途 径利用叶酸还原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶酸还原酶有抑制作用,因此不能生长。骨-脾融合细胞:在HAT中能生长,脾细胞可以利用次黄嘌呤,骨细胞提供细胞分裂功能。