神经示踪剂生物素葡聚糖胺（BDA）的用法

动物麻醉后将头部固定于动物实验用立体定向架上，切开右额顶头皮，用微型钻磨去颅骨形成5mm直径大小圆形骨窗，在手术显微镜下剪开硬脑膜，用微量注射器将10％BDA溶液(美国MolecularProbes公司产品)缓慢注入右侧的感觉运动区皮质(sensorimotor cortex)内。注射时将微量注射器固定在立体定向支架上，选择无血管区作为注射点，每个注射点分别在距皮层表面0.5、1.0和2.0mm处各注药一次，每次剂量70μl。每次注射后针头滞留1min，然后缓慢进退针。每个动物接受10个皮层注射点，BDA注射总量为2100μl。注射完毕后用薄层明胶海绵覆盖脑表面，缝合头皮。2周后再次麻醉动物，打开胸腔，用4℃生理盐水和4%多聚甲醛液行心脏灌注后，取出大脑和脊髓组织，置于4%多聚甲醛液中4℃保存，待处理。
BDA染色显影：分别取大脑和各段脊髓组织，脊髓分别取上颈段(C3-6)，胸段(T5-8)，腰段(L1-4)，用冰冻切片机连续切片，组织切片厚度为40μm。采用自由漂乳法将组织切片先后在以下溶液中孵化：含0.1％H202的甲醇溶液10min、含0.5％Triton X-IOOPBS溶液(PBS-T)30min，抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合液(avidin-biotin-peroxidase,美国Vector Laboratories公司产品)1h；用PBS-T液冲洗组织切片两次，每次各10min，最后在二氨基联苯胺(Vector laboratories公司产品)中显影5min。最后上玻片、风干、脱水及盖玻片覆盖。