作QPCR的
标准曲线
可以用PCR－
ELISA法
作。
具体如下：
PCR－ELISA法：
利用
地高辛
或
生物素
等标记
引物
，扩增产物被固相板上特异的探针所结合；
再加入抗地高辛或生物素酶标抗体－
辣根过氧化物酶
结合物，最终酶使底物显色。
常规的PCR－ELISA法只是
定性实验
，加入
内标
，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
通过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性质，从而得到该性质的数值所组成的曲线。
扩展资料：
实时荧光
定量PCR
技术，在
PCR反应体系
中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法：
1、SYBRGreenⅠ法：
在PCR反应体系中，加入过量SYBR
荧光染料
，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号。
而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
SYBR定量
PCR扩增
荧光
曲线图
、PCR产物
熔解
曲线图（单一峰图表明PCR扩增产物的
单一性
）。
2、
TaqMan探针
法：
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被
淬灭
基团吸收；
PCR扩增时，Taq酶的5’-3’
外切酶
活性将探针
酶切
降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。
即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。
PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的缺省（默认）设置是3-15个循环的荧光信号的
标准偏差
的10倍，即：
threshold
=
10*SDcycle
3-15。
利用已知起始
拷贝数
的
标准品
可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，
纵坐标
代
Ct值
。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
参考资料：
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