试述蛋白质样品制备技术的原则

1.
避免冷冻干燥
尽管有一些蛋白是经冷冻干燥处理后长出了晶体，但是大多数情况下并非如此。所以要尽可能避免冷冻干燥。如果蛋白已经这样了，准备点晶体之前，要用水或者缓冲液透析，除掉非挥发性的试剂和其他化学物质。
2.
避免硫酸铵沉淀
避免硫酸铵沉淀法作为纯化的最后一步或使用硫酸铵沉淀法来浓缩蛋白。因为硫酸铵很难除干净，对后续的结晶过程造成干扰。残存的微量的硫酸铵也会干扰晶体筛选的条件，造成结果的不可重复性。微量的硫酸铵也容易造成样品沉淀，以及在PEG和盐类物质存在时会出现过量的晶核。
3.
蛋白批次
在同一次条件筛选时，要避免样品不是同一批次纯化出来的。每一次纯化的条件和步骤都是不同的〔就像天下没有两片相同的树叶（Redondo添加）〕，所以筛选的时候应该使用同一批次纯化出来的蛋白。
4.
定性蛋白质
在拿去点晶体之前，应该定性判断你纯化出来的蛋白是不是你的目的蛋白。根据确定了的蛋白质性质，可以给筛选和优化提供参考。常用的蛋白质定性试验包括：
SDS-PAGE
Native
PAGE
Dynamic
Light
Scattering
IEF
(Isoelectric
Focusing)
Gel
Mass
Spectroscopy
根据这些试验的结果，我们可以判断：
蛋白样品的纯度
蛋白样品的同次性
不同批次纯化出来的蛋白的性质差异
蛋白质的稳定性
5.
蛋白需要达到什么纯度？
要拿去筛晶体，蛋白样品需要达到什么纯度？答案是越纯越好。但是这样一个答案不能让人满意。如何能更容易理解一些呢？一开始筛选时，根据考马斯亮蓝染色判断蛋白纯度应该达到90
到
95%。不过，考虑到总有进一步纯化的步骤，不可能达到‘绝对’的100%纯，所以没有必要追求‘绝对’纯，存在一点点的杂质蛋白是可以接受的。还要记住，结晶本身就是一个纯化过程。当筛选过程中没有晶体长出，甚至没有长的迹象，或者在优化条件时不能进一步提高晶体的质量了，这个时候就要考虑进一步提高蛋白浓度了。