硫酸盐还原菌的叠皿夹层法介绍

　　叠皿夹层法实质是将菌夹在上下两层培养基之间，使其造成一个相对无氧的环境，从而使SRB能在夹缝中生长。

　　具体做法是将已经富集好的菌液采用无菌操作技术稀释成不同浓度。将含有质量分数为2%琼脂的固体培养基熔化并保持在50℃左右，在无菌条件下，向培养皿（90mm×15mm）的皿盖中倒入约1/3高度的固体培养基，待其刚刚冷凝后，将不同浓度的稀释液吸取适量，快速涂布平板上，使稀释液渗透约30s后，在培养皿的中间位置倒入同种营养型固体培养基，直到将溢未溢的突起状态，随后迅速盖上皿盖并往下压，最终皿内不能有气泡。

　　去掉培养皿内外两层侧壁间多余的琼脂，并在其中灌入适量熔化的石蜡，使培养皿侧壁缝隙被石蜡密封，尽量不要留有气泡。培养一周后，在加有二价铁离子的平板中会长出黑色的SRB菌落，在酒精灯旁加热使固体石蜡熔化，由于上下两层培养基凝固时间不同，所以当移去内皿后，用镊子很容易将上层培养基揭起，从而露出下层培养基的菌落。当需要进行菌落挑取时,可以对其进行切块转移，放入液体培养基时捣碎即可。

　　该方法的优点是培养物均采用涂布或划线生长于营养琼脂夹层中，取菌落时可很方便地做到定点取菌，同时该方法不需要另外创建一个无氧环境，故省时、省力，具备了所有好氧、厌氧分离方法的优点。