鹦鹉热衣原体的细胞培养法介绍

　　常见有两种方法，一种是利用HeLa229细胞或McCoy细胞等进行分离培养，另一种则是通过鸡胚卵黄囊接种培养，随后均经过姬姆萨染色或荧光染色，最终利用显微镜鉴定包涵体。

　　细胞分离培养一直被视为衣原体检测的标准方法。该法的敏感性显著高于鸡胚培养法，而且某标本接种细胞的盲传培养可提高分离率。衣原体可在多种细胞中增殖、分离或培养最常用是McCoy和L929细胞。其他传代细胞如BHK21、LF、Vero等传代细胞均可供选用。用荧光标记的抗体、酶结合的单克隆抗体、碘或姬姆萨氏染色，胞浆中若出现特征性的包涵体，即可考虑存在衣原体。

　　由于绝大多数衣原体可在5～9d龄鸡胚卵黄囊内生长繁殖，鸡胚卵黄囊接种培养接种用的病料应预先用灭菌肉汤或Hank’s液制成10%的组织悬液，如有杂菌，需在悬液中加入链霉素（50mg/ml）和庆大霉素（50mg/ml），4℃下作用4～14h后，离心取上清液接种鸡胚卵黄囊，每胚0.3～0.5ml。继续培养，弃去前2d死亡的鸡胚。一般于接种后5～12d死亡，将死亡鸡逐渐形成的卵黄囊自鸡胚割离。并将其剪破，无菌生理盐水冲洗卵黄囊膜，除去卵黄，夹取卵黄囊膜一小块涂片，染色镜检。

　　细胞培养不利的一方面是必需有可以被检测的感染组织或器官，这就要求采样后要及时送到实验室，运输媒介要合适，不能混有青霉素，保持4℃或者液氮冷冻。