用双波长法测定两个物质的含量：样品在该波长λ1处有最大吸收。参比波长选择方法：对照品吸光度与波长λ1处相等时的波长λ2为参比波长。
双波长采用的原则是，被测物的化学指标随波长1有线性变化，随波长2无变化，则用两个波长的数值相除，就可以得到被测物指标的相对值。一般来说，波长2的值叫做背景值，波长1的值叫做变量值。
双波长分光光度法的关键
是正确选择两波长，要求被测组分合适。在两波长处的QA足够大，而干扰组分G和背景在两波长应有相同的吸光度(DA =0)。为满足上述要求，一般是将a2选在待测组分的最大吸收波长，入:是选在干扰组分等吸收波长。此法可测定浑浊样品，也可测定吸收光谱相互重叠的混合物样品，也是当杂质使主峰产生肩峰时测定主峰物质的较好定量方法。
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