关于myc基因的分析讨论介绍

　　国内外用于检测N-myc、L-myc及C-myc的方法大多采用各种杂交技术。由于应用放射性同位素，需要各种防护措施，不安全又复杂，且一次只能检测Myc基因家族中的一个基因，临床上很难常规应用。PCR－琼脂糖凝胶电泳技术简单、易行、快速，但由于灵敏度低，不能分开只相差3个bpDNA的L-myc和N-myc，所以只能检测C-myc的相对扩增，而不能检测N-myc或L-myc扩增或二者的同时扩增。而且，如果有N-myc或L-myc扩增或二者同时扩增时，即使有C-myc扩增，也会出现假阴性结果。我们首先把PCR技术与中性聚丙烯酰胺凝胶电泳及激光扫描技术结合起来，并用硝酸银试剂使凝胶上的Myc 基因双链染成黑褐色。这样的实验结果特异性高，方法简单，成本低，又避免了放射性同位素的一切弊端，很适合于临床应用。聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率高于琼脂糖凝胶电泳，具备分离只相差一个核苷酸的不同DNA片段的特性。在中性聚丙烯酰胺凝胶中，双链DNA片段的电泳迁移率主要由DNA片段长短决定，而与其碱基组成和顺序基本无关。基于以上原理，我们设计了此实验，目的是能把琼脂糖凝胶电泳上没有分开的只相差3 bp的N-myc和L-myc分开，作到一次可同时检测3种Myc基因的扩增情况。实验表明：用PCR-中性聚丙烯酰胺凝胶电泳和用PCR-琼脂糖凝胶电泳检测C-myc基因结果基本相符， 说明本研究建立的方法结果可靠。Myc基因是较早发现的一组癌基因，Myc基因的异常扩增或表达，参与了很多肿瘤的发生和发展。本研究方法对进行3种Myc基因在肿瘤形成过程中作用机理的研究，提供了简便易行的实验手段。